不同伴生物质对甘草皂苷类提取物的影响研究

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目的:以研究甘草提取物中伴生物质对甘草皂苷类成分物理化学性质、药代动力学以及药效学的影响,建立甘草指标性成分、物理化学参数结合药效的综合评价方法;并探讨三者之间的相关性,为科学、合理的剔除伴生物质及中药提取物的精制分离提供一定的依据。  方法1.采用膜分离、大孔树脂吸附和水提醇沉技术制备含不同伴生物质的甘草皂苷类提取物样品并考察其指标性成分含量及物理化学性质。采用粘度计、浊度仪和粒径仪等分别测定各样品的粘度、浊度、粒径和 Zeta电位等;采用酶水解和考马斯亮蓝G-250比色法分别测定各样品淀粉和蛋白质的含量。2.伴生物质对甘草皂苷类成分药代动力学的影响:应用LC-MS/MS测定大鼠灌胃含不同伴生物质的甘草皂苷提取物后血浆中甘草次酸的含量。3.伴生物质对甘草皂苷类成分抗肝癌的药效学影响研究:①采用CCK-8法检测含不同伴生物质的甘草皂苷类成分对人源肝癌细胞HepG2增殖的影响,采用PI染色法,运用荧光显微镜对凋亡细胞进行观察统计。②构建小鼠肝癌模型,考察伴生物质对甘草皂苷类成分在H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用影响。  结果1.以指标性成分和物理化学参数为综合依据,从膜分离、醇沉和大孔树脂吸附制备的14个样品中筛选出原液、孔径0.8μm的陶瓷膜(样品0.8μm)、截留分子量为10k Da(样品10k Da)、70%醇沉(样品70%)和PHD600大孔吸附树脂(样品PHD600)共5个样品,进行生物活性的比较研究。2.给大鼠灌胃筛以上5个样品(浓缩为含等量的甘草酸),与原液中甘草次酸(GA)药动学参数相比较,样品0.8μm中GA的Tmax和T1/2缩短;样品10 k Da中GA的Cmax和AUC0-t显著提高;样品70%和PHD600纯化中GA的Tmax和T1/2值减小,Cmax和AUC0-t的值显著增大。3.①在含甘草酸0.2 mg/mL时,样品70%和原液对HepG2的抑制率接近,而样品0.8μm和10 k抑制率明显增大,样品70%的抑制率极高,可能存在某种成分毒死细胞。荧光显微镜下观察到各样品是通过诱导凋亡而作用,与原液相比样品0.8μm诱导凋亡细胞的个数显著增多(P<0.05),样品10 k和PHD600无显著差异。②与原液相比,样品0.8μm和10k组的小鼠肿瘤质量显著减小(P<0.05)。  结论:本文通过初步探索含伴生物质对甘草皂苷类成分在物理化学参数、细胞水平和体内过程等方面的差异。研究结果表明伴生物质对甘草皂苷类成分生物活性有一定的影响,但是中药治疗疾病是从多途径、多方位、多靶点发挥作用,其药理作用也是多方面的。还需进一步对伴生物质定性和定量研究,具体明确伴生物质存在的实际意义,结合现代工业设备对中药进行合理精制。
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