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1.目的： 复方配伍使用时不同中药的众多成分间构成了复杂的相互作用体系，这些相互作用是复方整体效应的重要基础。肝脏Ⅰ相药物代谢酶是药物相互作用的主要机制，诱导和抑制药物代谢酶可以显著改变药物的药理活性。本实验以中药复方半夏泻心汤为研究对象，通过复方的不同配伍对肝脏Ⅰ相药物代谢酶产生不同的作用，继而影响复方中活性成分的代谢差异，并以此为出发点展开课题思路。因此，本实验通过研究半夏泻心汤全方及不同配伍组对黄连生物碱类成分和黄芩、甘草中黄酮成分在大鼠肝微粒体中代谢的影响，探讨复方配伍对其代谢影响的作用机制，应用体外肝微粒体孵育法和体内cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对肝脏Ⅰ相代谢酶的活性影响，以评价半夏泻心汤组方配伍合理性。 2.方法与结果: 2.1、肝微粒体制备及CYP450酶含量的测定 将大鼠随机分为5组，半夏泻心汤全方组，辛温开痞组，苦寒降逆组及甘滋补益组，空白对照组，差速离心法制备大鼠肝微粒体，考马斯亮蓝法测蛋白浓度，采用CO还原差示光谱法测定大鼠CYP450的含量。结果显示，与空白对照组组对比，各给药配伍组与其差异极显著(P<0.01)。全方组、辛开组和苦降组对CYP450均有抑制作用，而甘补组对CYP450起诱导作用。 2.2、半夏泻心汤及不同配伍组对生物碱、黄酮活性成分在大鼠肝微粒体代谢影响 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法，考察半夏泻心汤全方，辛温开痞组，苦寒降逆组及甘滋补益组对各活性成分在大鼠肝微粒体系中的代谢变化影响。实验结果表明，各活性成分在选定的孵育时间内呈线性消除，在空白肝微粒体中生物碱成分代谢速率顺序：黄连碱>小檗碱>药根碱>巴马汀；黄芩黄酮成分：汉黄芩素>黄芩素>汉黄芩苷>黄芩苷；甘草黄酮成分：甘草素>异甘草素>甘草苷>异甘草苷；与空白组相比，除辛温开痞组对巴马汀的代谢无抑制作用外，其余配伍组对黄连生物碱成分均呈抑制作用，全方的抑制作用最为显著；黄芩中黄酮成分全方组对黄芩素和汉黄芩素代谢抑制作用较其他配伍组显著，且各配伍组间与空白组无显著性差异，黄芩昔和汉黄芩昔在全方组和苦降组中代谢抑制作用较辛开组和甘补组显著；甘草黄酮成分中唯甘草素体外肝微粒体代谢速率显著高于其他成分，与空白组相比，苦降组对甘草素抑制作用最显著，其次全方组。 2.3、肝微粒体体外温孵法研究半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450酶活性的影响 采用在体诱导-体外肝微粒体温孵方法，考察半夏泻心汤全方，辛温开痞组，苦寒降逆组及甘滋补益组对各探针底物在大鼠肝微粒体系中的代谢变化影响。通过建立各亚型酶(CYP1A2、CYP2C6，CYP2E1，CYP3A1/2)探针底物及相应代谢产物的色谱条件，并测定各代谢产物在肝微粒体体外孵育液中含量，计算代谢速率，以反映各给药组对肝微粒体CYP1A2、CYP2C6，CYP2E1，CYP3A1/2亚型酶活性的影响。 实验结果表明，与空白组相比，全方组，苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01)：辛开组对CYP1A2、CYP2C6有抑制作用(P<0.01)，而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用(P>0.01)；甘补组对CYP1A2、CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01)，而对CYP3A1/2无抑制作用(P>0.01)。 2.4、Cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450体内肝代谢研究 建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中CYP1A2、CYP2C6、CYP2E1、CP3A1/2相应的探针底物咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、咪达唑仑的分析方法。计算各成分药代动力学参数，实验结果表明，通过探针药物药动学参数AUC和CL可以看出，与空白组相比，全方组抑制CYP2C6、CYP2E1的表达，而对CYP1A2、CYP3A1/2无显著性差异；辛开组仅对CYP2C6起抑制作用，对其他的亚型酶无显著性差异；苦降组抑制CYP1A2和CYP2C6表达，对CYP2E1起诱导作用，而对CYP3A1/2无显著性差异；甘补组对CYP1A2、CYP2E1诱导作用，抑制CYP2C6，而对CYP3A1/2亦无显著性差异。 3.结论: 半夏泻心汤及不同配伍组对黄连生物碱、黄芩和甘草黄酮活性成分在大鼠肝微粒体中代谢存在的差异，其中肝脏Ⅰ相药物代谢酶为主要原因之一，通过各给药组对P450酶产生诱导或抑制作用，进而影响其代谢机制。体内外肝代谢研究均表明半夏泻心汤对CYP450整体呈抑制作用，尽管各具体亚型酶代谢情况体内外并非完全一致，另一方面也反映了体外代谢预测体内的过程中仍然存在一些问题，由种属差异或者体外模型的非生理特性导致的预测准确性的降低，以及药物的蛋白结合等。