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目的:
目前，国内外尚没有成熟、可靠检测类过敏反应的试验方法，更没有系统检测类过敏反应的评价体系。本研究依据类过敏反应发病特点，从细胞、组织、整体三个层次对药物类过敏反应的试验模型和检测方法进行研究，探索并建立适用于中药注射剂类过敏反应检测的试验方法和评价体系。
方法:
以C48/80为工具药物，建立RBL-2H3细胞类过敏试验、大鼠皮肤类过敏试验、小鼠全身类过敏试验，在此基础上，将此三种方法进行科学组合，建立“细胞-组织-整体”类过敏反应评价体系。应用该组合，对4种类过敏阳性反应药物进行类过敏反应再评价，对2种中药注射剂进行类过敏反应综合评价。
结果:
1) RBL-2H3细胞类过敏试验方法的研究:
RBL-2H3细胞作为药物类过敏反应体外检测模型，其最佳种植密度为0.5-1.0*105/ml，最佳培养时间为24h。
C48/80致RBL-2H3细胞脱颗粒试验以25-50μg/ml浓度反应30min为优选条件;与台氏液及含高钙离子台氏液相比，无酚红DMEM液可提高C48/80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒敏感性。
C48/80、Tween80均具有致RBL-2H3细胞脱颗粒作用，可使细胞上清β-己糖苷酶、组胺浓度明显升高，并呈现良好的“量-时-效”关系，可作为RBL-2H3细胞脱颗粒阳性药物。类过敏阳性反应药物内毒素、天花粉蛋白注射液均未见致RBL-2H3细胞脱颗粒作用。
2)大鼠皮肤类过敏试验方法研究:
根据皮肤蓝斑渗出原理，对模型影响因素进行了考察，对试验方法进行了优化，确定大鼠皮肤类过敏反应试验方法为:大鼠称重后，25％乌拉坦麻醉(4ml/kg)，背部剃毛3*4cm2，选用胰岛素注射器(口径0.33mm)在其脊柱两侧皮内注射4-6个药物点，50-100μl/点，立即尾静脉注射0.5％伊文思蓝染液lml，15min时颈动脉放血处死大鼠，剪取背部皮肤，拍照并测量蓝斑直径，蓝斑剪碎于3ml丙酮-生理盐水(7∶3)混合液浸泡过夜，5000rpm离心10min，分光光度计610nm测定上清液OD值。
该方法操作简便，试验周期短，需用药量少，检测敏感性高，结果重复性好，但易受药物本身特性干扰而出现假阳性。
采用优化的大鼠皮肤类过敏试验方法，发现Tween80、内毒素、中华眼镜蛇毒素、天花粉蛋白注射液类过敏反应均呈阳性。
3)小鼠全身类过敏试验方法研究:
以类过敏反应症状为金指标，创建了小鼠全身类过敏试验方法:制订了小鼠全身类过敏反应症状表;制定了小鼠全身类过敏反应评定标准;引入了血浆组胺、β-己糖苷酶和类胰蛋白酶等类过敏反应生物标志物检测方法。
以C48/80为受试药物，对其类过敏反应症状表现与其血液生物标志物水平进行分析，结果血浆组胺、β-己糖苷酶、类胰蛋白酶水平与动物反应症状表现高度相关，推荐可作为类过敏反应首选检测指标。
采用该方法评定阳性反应药物类过敏反应强度为:C48/80:极强阳性;Tween80:阳性;眼镜蛇毒素:阴性;内毒素:阴性;天花粉蛋白注射液:阴性。
与现有整体动物方法比较，该方法具有简便、客观、敏感、可量化的诸多优点，建议推广使用。
4)“细胞-组织-整体”类过敏试验组合评价的研究:
以RBL-2H3细胞、大鼠皮肤、小鼠全身类过敏试验三种方法，建立了“细胞-皮肤-全身”类过敏反应试验的组合评价体系。
应用该组合，对Tween80、中华眼睛蛇毒素、内毒素、天花粉蛋白注射液4种物质的类过敏反应性进行了再评价。结果:Tween80可诱发RBL-2H3细胞上清β-己糖苷酶OD值和组胺浓度的升高，可促使大鼠皮肤蓝斑直径和蓝斑OD值的上升，可引起小鼠明显的症状反应和血浆组胺水平的提高，显示出明显的药物类过敏反应，且具有良好的量效关系，推荐可作为类过敏反应检测的工具药使用;中华眼睛蛇毒素、内毒素、天花粉蛋白注射液类过敏反应阴性。
应用该组合，对血塞通注射液和痰热清注射液2味中药注射剂的类过敏反应性进行了综合评价。结果:血塞通注射液在临床剂量的5-10倍时类过敏反应阴性，高于临床剂量17、36倍时，类过敏反应弱阳性和强阳性;痰热清注射液在相当临床常用剂量10倍时类过敏反应阴性，高于临床剂量30倍时类过敏反应弱阳性。
结论:
“细胞-组织-整体”类过敏反应试验组合评价的特点:
RBL-2H3细胞试验是药物对细胞的直接作用，具有方法简便、快速、灵敏等特点，适用于批量样品的初步筛选，但因某些药物对细胞有毒性而出现假阳性;
大鼠皮肤试验是药物对组织的直接作用，因皮肤富含肥大细胞，故反应比较典型和敏感，但对于某些药物因其药理效应或刺激作用可能导致皮肤血管扩张而出现假阳性;
小鼠全身试验是完全按照临床给药特点而设计制作，制订的类过敏反应症状表和引入的血液类过敏反应标志物的检测对类过敏反应的评判具有直观和量化的特点，但由于小鼠的个体差异，每次试验所需动物数较多。
由此三个试验方法组成的组合评价体系可以根据药物的特点和试验目的，科学地进行试验组合，不仅可保证类过敏反应检测的灵敏和快速，而且能有效排除因药物本身特点所造成的试验结果的假阳性。建议推广使用。