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背景：原发性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是我国最常见的肿瘤之一，每年发生的肝癌约占全世界40％，居恶性肿瘤死亡率的第2位。肝癌对放化疗都不敏感，目前主要采用以手术治疗为主的综合治疗，但肝癌根治性切除术后的复发率仍居高不下。肿瘤生物治疗能够激发机体免疫功能，杀伤临床上难以发现的肿瘤细胞，有助于防止肿瘤复发和转移，因此寻找有效的生物治疗方法，对防治肝癌复发和转移具有重要意义。葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA，SEA)是一种具有很强的激活T细胞能力的细菌性超抗原，能够通过激活免疫细胞，产生多种细胞因子和超抗原依赖细胞介导的细胞毒作用(Superantigendependentcellmediatedcytotoxi--city，SDCC)杀伤肿瘤细胞。但是单用SEA进行免疫治疗会引起一系列全身毒性反应。转染SEA基因的肿瘤瘤苗能提高肿瘤免疫原性，诱导机体局部和全身的抗肿瘤免疫应答，从而有效控制肿瘤生长，但无法提高T细胞的肿瘤特异性杀伤能力。树突状细胞(dendriticcells，DCs)是机体免疫系统中已知的功能最强的专职抗原递呈细胞(ant--igenpresentingcell，APC)，能有效激活T细胞，引起特异性免疫反应。DCs与肿瘤细胞的融合瘤苗是一种新型的DC疫苗，既表达MHCⅠ、Ⅱ类分子及CD80、CD86、CD54等共刺激分子，又能内源性表达肿瘤特异抗原及肿瘤相关抗原。但单用肿瘤细胞DC融合瘤苗还不能非常有效地抑制肿瘤在动物体内的生长，肿瘤DC融合瘤苗的免疫刺激能力有待提高。本研究室已经成功构建了转染SEA基因的BEL-7402肝癌细胞(简称SEA-肝癌细胞)，并已证明SEA-肝癌细胞在体外培养能够分泌SEA，比普通BEL-7402肝癌细胞(简称肝癌细胞)更能诱导提高T细胞的肿瘤杀伤能力。我们设想在此基础上，将SEA-肝癌细胞与脐血来源的DCs进行融合，制备SEA-肝癌DC融合瘤苗，一方面增强肝癌细胞免疫原性；另一方面增强肿瘤抗原递呈能力，提高SEA作用的特异性，减少应用SEA产生的副作用。
目的：本研究拟在已构建的SEA-肝癌细胞基础上，采用细胞融合技术，将SEA-肝癌细胞与脐血来源的DCs进行融合，制备SEA-肝癌DC融合瘤苗，检测其在体外刺激同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkiller，CIK)对肝癌细胞的杀伤作用。寻求整合发挥SEA高效激活免疫细胞能力和DC融合瘤苗激发免疫细胞特异性抗肿瘤作用优点的肿瘤生物治疗方法。
方法：1)用免疫组化方法检测SEA-肝癌细胞中SEA蛋白的表达。2)流式细胞仪检测SEA-肝癌细胞和肝癌细胞表面抗原呈递相关分子的表达。3)从脐血中分离单个核细胞，诱导培养DCs，通过细胞形态学和检测细胞表面分子表达情况进行鉴定。4)分离并培养诱导CIK细胞。5)用PEG法融合DCs和SEA-肝癌细胞或肝癌细胞，制备SEA-肝癌DC融合瘤苗，并以肝癌DC融合瘤苗作为对照。6)两种DC融合瘤苗分别与CIK细胞共培养72h，用MTT法检测SEA-肝癌DC融合瘤苗、肝癌DC融合瘤苗激活的CIK细胞对肝癌细胞的杀伤能力，对结果进行对比分析。
结果：1)转染SEA基因的SEA-肝癌细胞高表达SEA蛋白，而肝癌细胞不表达SEA蛋白。2)肝癌细胞和SEA-肝癌细胞均高表达HLA-ABC、CD54，低表达CD80、CD86和HLA-DR；SEA-肝癌细胞表面CD54的阳性率高于肝癌细胞。3)从脐血中培养诱导出具有典型形态的DCs，流式细胞仪检测DCs表面分子阳性率分别为：HLA-ABC(98.86±0.95％)，HLA-DR(65.03±12.52％)，CD1a(54.76±29.16％)，CD54(88.09±7.11％)，CD80(85.03±8.69％)，CD86(89.67±12.51％)，CD83(58.22±14.24％)。4)培养1、7、14、21天的CIK细胞中CD3+CD56+细胞的比例分别为16.4％、37.7％、49.2％、69.7％。5)两种DC融合瘤苗激活的CIK细胞对肝癌细胞的杀伤率均高于DCs和肝癌细胞共培养激活的CIK细胞；SEA-肝癌DC融合瘤苗激活的CIK细胞对肝癌细胞的杀伤效率高于肝癌DC融合瘤苗激活的CIK细胞。
结论：1)SEA-肝癌细胞经过多次冻存复苏和传代培养，仍能够稳定表达SEA蛋白。2)肝癌细胞和SEA-肝癌细胞表面高表达HLA-ABC、CD54，低表达HLA-DR和CD80、CD86。SEA-肝癌细胞表面CD54表达水平高于肝癌细胞。3)用脐血单核细胞能培养诱导出具有典型形态的成熟DCs。4)CIK细胞中CD3+CD56+细胞的比例随着培养时间延长而提高。5)成功制备SEA-肝癌DC融合瘤苗，该瘤苗比肝癌DC融合瘤苗更有效地提高CIK细胞的体外抗肿瘤能力。