新型载体PEI修饰树脂固定化脂肪酶及其在对2-氯丙酸酯拆分中的应用

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2-氯丙酸是合成农药、染料和农林化学品的重要中间体,然而只有光学活性的2-氯丙酸合成的产品才具有较高的生理活性或药理作用。由2-氯丙酸及其酯外消旋体为原料合成的农药和医药中间体,由于其含有低效或无效或有毒副作用的对映异构体,不仅活性低,而且会加剧环境污染。因此,研究如何高效地获取光学活性的2-氯丙酸具有十分重要的意义。 本文以2-氯丙酸为模型化合物,研究了猪胰脂肪酶(PPL)、解脂假丝酵母脂肪酶(CLL)和褶皱假丝酵母脂肪酶(CRL)催化对映选择性酯水解反应制备该化合物的基本规律,确定了最佳酶和酶促拆分的最佳反应条件。为了克服游离酶催化的一些不足之处,我们制备了新型固定化载体PEI/D152复合树脂对脂肪酶CRL,进行固定化,寻求最佳固定化方案,并将固定化酶应用于2-氯丙酸甲酯的拆分。 实验结果表明,在PEI浓度为6 g/L,反应温度为35℃时制备的PEI/D152复合树脂效果最佳,PEI吸附量达150 mg/g(载体)。以PEI/D152为载体,用载体表面涂布法在pH=7.2的磷酸缓冲溶液中,25℃下对40mg脂肪酶CRL/1 g PEI/D152载体进行固定化,能得到活性最大的固定化酶,且固定化酶的酸碱稳定性和热稳定性均较游离酶有所提高。将固定化酶应用到催化拆分外消旋 2-氯丙酸甲酯反应中,固定化酶仍能保持游离酶的催化拆分优势,当转化率<50%时,产物(S)-2-氯丙酸对映体过量值达到89%以上。循环反应3次后,仍能保持较高活性,相对酶活达65%。
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