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近年来恶性肿瘤的发病率和死亡率一直呈明显上升趋势,用于恶性肿瘤治疗的方法主要包括放射治疗、手术治疗和药物治疗,其中对于实体瘤和转移肿瘤的治疗,药物治疗占有重要地位,特别是肿瘤化疗取得了很大程度上的进步。多西他赛是目前广泛研究应用的一种新型紫杉烷类抗肿瘤药物,其作用机制是通过刺激导管素的聚合,加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用,导致形成稳定的非功能性微管束,因而破坏肿瘤细胞的有丝分裂。多西他赛在临床上被广泛地应用于卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌和其它多种癌症的治疗。但多西他赛由于溶解度差、生物利用度低及毒性大等使其临床应用受到限制,目前临床应用的剂型仅为注射液,泰索帝(?)和多帕菲(?),该注射剂含有大量非离子表面活性剂Tween-80。其中药物本身或吐温-80会引起严重的过敏反应如过敏反应,体液潴留,神经、骨骼肌肉毒性和中性粒细胞减少症等,限制了其临床应用。因此,研究、探索新型高效、低毒药物给药系统成为药剂学研究热点之一本课题旨在研发新的给药系统提高多西他赛的水溶性,避免吐温-80表面活性剂的使用,同时选择合适的肿瘤靶向因子将抗癌药物专一性或选择性的输送到肿瘤组织,减少药物在正常组织器官的分布,降低其对正常组织器官的毒副作用,利于未来用于癌症的治疗。本研究课题首次制备三种不同类型的可生物降解的脂质纳米混悬剂：一、被动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂(DTX-lipid-based-docetaxel-nanosuspensions, DTX-LNS);二、长循环多西他赛脂质纳米混悬剂(pLNS);三、叶酸介导的主动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂(tLNS)。本课题对这三种多西他赛脂质纳米混悬剂进行了系统的理化性质研究、药效学评价,以及体内药代动力学行为和体内组织分布行为研究,研究内容与结果如下：一、多西他赛脂质纳米混悬剂药物含量测定方法的建立采用高效液相色谱法测定多西他赛脂质纳米混悬剂中多西他赛的含量,并对方法学进行了研究。结果表明此方法简便快速、灵敏度高、专属性强,能准确测定多西他赛的含量。二、被动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂的研究采用高压均质法制备DTX-LNS,采用冷冻干燥法以甘露醇作为冻干保护剂制备DTX-LNS冻干制剂。使用透射电镜观察粒子外观形态,ZETASIZER3000激光粒度分布与电势分析仪考察其粒径、粒径分布。采用透析袋法考察其体外释药行为。肿瘤细胞毒性研究中,以多西他赛市售注射液多帕菲(?)为对照组,采用噻畔蓝比色法(MTT法)测定多帕菲(?)、DTX-LNS和Blank-LNS对卵巢癌细胞株(SK-OV-3)和小鼠黑色素瘤细胞株(B16)的细胞毒性作用。药效学研究中,进行了DTX-LNS与市售多帕菲⑧注射液对荷小鼠黑色素瘤(B16)昆明鼠的体内抗肿瘤效果的比较。试验结果显示在优化条件下采用高压均质法制备DTX-LNS,制得的纳米混悬剂粒子形态规整,平均粒径为200.0±3.42nm, zeta电位为-11.15±0.99mV,稳定性好。多帕菲⑧与DTX-LNS体外释药均符合一级动力学数学模型,释放曲线拟合方程分别为：DTX-LNS:ln(100-Q)=-0.1961t+4.5543, r=0.9946,多帕菲⑧：In (100-Q)=-0.1859t+4.4038, r=0.9991.多西他赛脂质纳米混悬剂的细胞毒性与多帕菲(?)注射液的细胞毒性相当。体内药效学研究结果表明,与多帕菲(?),LNS作为抗肿瘤药物载体可通过被动靶向作用,使药物蓄积于肿瘤部位,增强药物的抗肿瘤作用同时降低药物对正常组织的毒副作用。采用高压匀质发制备的DTX-LNS,可进行产业化生产,粒径小,体内抑瘤效果好,毒性低,是一种具有开发上市潜力的药物新剂型。三、长循环和主动靶向多西他赛脂质纳米混悬剂的研究采用高压均质法以PEG修饰的脂质载体材料制得表面有PEG修饰的长循环脂质纳米混悬剂(pLNS)。利用叶酸上的羧基与DSPE-PEG上的氨基通过DCC反应制得DSPE-PEG-FA,将DSPE-PEG-FA掺入脂质载体材料中成功制备主动靶向脂质纳米混悬剂(tLNS)o使用透射电镜观察粒子外观形态,ZETASIZER3000激光粒度分布与电势分析仪考察其粒径、粒径分布。采用透析袋法考察其体外释药行为。肿瘤细胞毒性研究中,采用噻唑蓝比色法(MTT法)研究多帕菲(?)、pLNS、tLNS、Blank-pLNS和Blank-tLNS对细胞表面低表达叶酸受体的肿瘤细胞人肝癌细胞株(HepG2)和细胞表面高表达叶酸受体的肿瘤细胞小鼠黑色素瘤细胞株(B16)的细胞毒性作用。药效学研究中,进行了pLNS、tLNS与市售多帕菲⑧注射液对荷小鼠黑色素瘤(B16)昆明鼠的体内抗肿瘤效果的比较。药物代谢与组织分布研究中,比较pLNS、tLNS与市售多帕菲(?)在荷小鼠黑色素瘤(B16)昆明鼠中的分布,并进行靶向性评价。本部分制得的pLNS、tLNS的平均粒径分别为204.2±6.18nm、220.6±9.54nm, zeta电位分别为-33.83±0.35mV,-27.80±0.77mV。体外释放均符合一级动力学数学模型。肿瘤细胞毒性试验结果表明,与多帕菲(?)相比,两种脂质纳米混悬剂的抗肿瘤活性明显增强。对于主动靶向制剂组,tLNS对B16细胞的IC50值明显低于pLNS的IC50值(P<0.05),而对于HepG2细胞的IC50值没有显著性差异,细胞毒性相当。结果说明,对于细胞表面高表达叶酸受体的肿瘤细胞,由于其表面大量的叶酸受体与连有叶酸的载体结合,使抗癌药物可以更多的进入细胞内部,发挥抑瘤作用,因此,体外抑瘤中,与pLNS相比,tLNS显示出较强的抗肿瘤活性。药效学实验结果表明,pLNS组与Duopafei(?)组相比具有明显的抑瘤效果,tLNS组又有更好的治疗效果。tLNS组与Duopafei(?)组比较,瘤体积减小明显(P<0.01),表明制剂组与多帕菲(?)注射液组相比疗效更好。同时小鼠体重变化相差明显(p<0.01),N.S组、Blank-pLNS组、Blank-tLNS组、pLNS组和tLNS组,小鼠体重均有明显增长,唯有注射液多帕菲(?)组小鼠体重下降。由于体重变化是判断制剂毒性的一个重要指标,因此上述结果说明各多西他赛脂质纳米混悬剂的毒性作用远小于市售注射液多帕菲,具有临床用药的价值。小鼠体内药代动力学试验证明LNS、pLNS与tLNS脂质纳米混悬剂静脉注射给药后,均可延长药物在小鼠体内的滞留时间。对三种纳米混悬剂的瘤内靶向性进行评价,结果显示,pLNS组瘤的总靶向效率Te由多帕菲(?)注射液组的5.22%提高到5.67%(1.09倍),其相对摄取率re和瘤内峰浓度Ce分别为5.22和1.02；tLNS组瘤的总靶向效率Te由多帕菲(?)注射液组5.22%提高到6.40%(1.23倍),是长循环脂质纳米混悬剂的1.13倍,其相对摄取率re和瘤内峰浓度Ce分别为5.92和1.17。这些结果进一步说明了,与pLNS相比,多西他赛tLNS有更好的肿瘤靶向效率,可更明显的抑制肿瘤生长。综上所述,本研究制备的三种多西他赛脂质纳米混悬剂是一种多西他赛新剂型,制备工艺简单可行,重现性好,适合产业化,改善了多西他赛的溶解度,增强了其抗肿瘤作用同时降低了其毒副作用,是一种极有临床应用前景的多西他赛新剂型。