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目的：
通过对胃癌MGC-803细胞系中PMP22+细胞的分选和人为干扰敲减PMP22的表达，来探讨PMP22表达水平与胃癌干细胞生物学特性的关系。探索PMP22作为胃癌干细胞表面标志物的可能性。
方法：
1.通过无血清微球体悬浮培养胃癌MGC-803细胞系的方法富集胃癌干细胞。运用流式细胞术、Real-time PCR、Western blotting的方法检测微球体细胞与贴壁细胞中PMP22的表达情况。
2.运用流式细胞分选技术实现对胃癌MGC-803细胞系中PMP22+细胞的分离。对PMP22+与PMP22-两种细胞进行细胞多向分化实验、琼脂糖克隆形成实验、体外微球体形成实验、细胞增殖活力检测和细胞耐受顺铂化疗实验，比较PMP22+与PMP22-两种细胞的干细胞生物学特性。
3.在胃癌MGC-803细胞系中使用两种不同的PMP22shRNA敲减PMP22表达水平。对PMP22敲减组与对照组细胞进行琼脂糖克隆形成实验、体外微球体形成实验、细胞增殖活力检测、细胞耐受顺铂化疗实验和小鼠体内成瘤实验，比较PMP22敲减组与对照组细胞的干细胞生物学特性。
4.采用mRNA表达谱芯片技术对PMP22敲减组与对照组细胞进行分析，将表达差异的基因按耐药基因、肿瘤干性相关基因、癌基因和抑癌基因进行分类。
结果：
1.胃癌MGC-803细胞在低吸附、无血清培养基中悬浮培养形成微球体。流式细胞术检测微球体细胞中PMP22+细胞比例为15.62%，显著高于贴壁培养组细胞中PMP22+细胞比例3.64%。Real-time PCR与Western blotting的结果显示，微球体细胞中PMP22的mRNA和蛋白水平都显著高于贴壁培养组细胞（P＜0.01）。
2.利用流式细胞术成功分选胃癌MGC-803细胞系中PMP22+和PMP22-细胞。体外贴壁培养PMP22+细胞相应时间后，重新上流式细胞仪检测发现，PMP22+细胞减少，PMP22-细胞增加，即PMP22+细胞分化产生了PMP22-细胞。琼脂糖克隆形成实验中，PMP22+细胞形成克隆的大小、数量明显多于PMP22-细胞形成的克隆（P＜0.05）。无血清微球体悬浮培养实验中，PMP22+细胞所形成的微球体大小、数量明显多于PMP22-细胞形成的微球体（P＜0.01）。MTT实验测得PMP22+细胞的生长速度显著高于PMP22-细胞（P＜0.01）。在耐药实验中，PMP22+细胞对顺铂的耐受能力显著强于PMP22-细胞（P＜0.01）。
3.在胃癌MGC-803细胞系中使用两种不同的PMP22shRNA成功敲减PMP22表达。琼脂糖克隆形成实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞形成克隆的大小、数量明显少于对照组细胞形成的克隆（P＜0.001）。无血清微球体悬浮培养实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞所形成的微球体大小、数量明显少于对照组细胞形成的微球体（P＜0.001）。MTT实验测得PMP22敲减组的胃癌细胞的生长速度显著低于对照组细胞（P＜0.001）。在耐药实验中，PMP22敲减组细胞对顺铂的耐受能力显著弱于对照组细胞（P＜0.001）。在裸鼠体内成瘤实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞形成的肿瘤比对照组细胞形成的肿瘤速度更慢、体积更小（P＜0.001）。
4.利用mRNA表达谱芯片技术检测PMP22敲减组与对照组中表达差异的基因，其中，与肿瘤干性相关基因的分析结果如下：与对照组相比，PMP22敲减组中IKBKB、MAML1、DDR1、NOTCH1、FLOT2明显下调。
结论：
1.通过无血清微球体悬浮培养可富集胃癌干细胞，并且胃癌干细胞中PMP22表达升高。
2.通过流式细胞术可有效分选PMP22+细胞。PMP22+细胞有较强的胃癌细胞干细胞特性，即多向分化能力、自我更新能力、快速增殖能力和耐药能力。
3.在胃癌细胞中敲减PMP22的表达可明显抑制胃癌细胞的干细胞特性，即自我更新能力、快速增殖能力、耐药能力和体内成瘤能力。
4.在胃癌MGC-803细胞水平中证实，PMP22+细胞具有胃癌干细胞的生物学特性。PMP22可能为胃癌干细胞的表面标志物。
通过对胃癌MGC-803细胞系中PMP22+细胞的分选和人为干扰敲减PMP22的表达，来探讨PMP22表达水平与胃癌干细胞生物学特性的关系。探索PMP22作为胃癌干细胞表面标志物的可能性。
方法：
1.通过无血清微球体悬浮培养胃癌MGC-803细胞系的方法富集胃癌干细胞。运用流式细胞术、Real-time PCR、Western blotting的方法检测微球体细胞与贴壁细胞中PMP22的表达情况。
2.运用流式细胞分选技术实现对胃癌MGC-803细胞系中PMP22+细胞的分离。对PMP22+与PMP22-两种细胞进行细胞多向分化实验、琼脂糖克隆形成实验、体外微球体形成实验、细胞增殖活力检测和细胞耐受顺铂化疗实验，比较PMP22+与PMP22-两种细胞的干细胞生物学特性。
3.在胃癌MGC-803细胞系中使用两种不同的PMP22shRNA敲减PMP22表达水平。对PMP22敲减组与对照组细胞进行琼脂糖克隆形成实验、体外微球体形成实验、细胞增殖活力检测、细胞耐受顺铂化疗实验和小鼠体内成瘤实验，比较PMP22敲减组与对照组细胞的干细胞生物学特性。
4.采用mRNA表达谱芯片技术对PMP22敲减组与对照组细胞进行分析，将表达差异的基因按耐药基因、肿瘤干性相关基因、癌基因和抑癌基因进行分类。
结果：
1.胃癌MGC-803细胞在低吸附、无血清培养基中悬浮培养形成微球体。流式细胞术检测微球体细胞中PMP22+细胞比例为15.62%，显著高于贴壁培养组细胞中PMP22+细胞比例3.64%。Real-time PCR与Western blotting的结果显示，微球体细胞中PMP22的mRNA和蛋白水平都显著高于贴壁培养组细胞（P＜0.01）。
2.利用流式细胞术成功分选胃癌MGC-803细胞系中PMP22+和PMP22-细胞。体外贴壁培养PMP22+细胞相应时间后，重新上流式细胞仪检测发现，PMP22+细胞减少，PMP22-细胞增加，即PMP22+细胞分化产生了PMP22-细胞。琼脂糖克隆形成实验中，PMP22+细胞形成克隆的大小、数量明显多于PMP22-细胞形成的克隆（P＜0.05）。无血清微球体悬浮培养实验中，PMP22+细胞所形成的微球体大小、数量明显多于PMP22-细胞形成的微球体（P＜0.01）。MTT实验测得PMP22+细胞的生长速度显著高于PMP22-细胞（P＜0.01）。在耐药实验中，PMP22+细胞对顺铂的耐受能力显著强于PMP22-细胞（P＜0.01）。
3.在胃癌MGC-803细胞系中使用两种不同的PMP22shRNA成功敲减PMP22表达。琼脂糖克隆形成实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞形成克隆的大小、数量明显少于对照组细胞形成的克隆（P＜0.001）。无血清微球体悬浮培养实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞所形成的微球体大小、数量明显少于对照组细胞形成的微球体（P＜0.001）。MTT实验测得PMP22敲减组的胃癌细胞的生长速度显著低于对照组细胞（P＜0.001）。在耐药实验中，PMP22敲减组细胞对顺铂的耐受能力显著弱于对照组细胞（P＜0.001）。在裸鼠体内成瘤实验中，PMP22敲减组的胃癌细胞形成的肿瘤比对照组细胞形成的肿瘤速度更慢、体积更小（P＜0.001）。
4.利用mRNA表达谱芯片技术检测PMP22敲减组与对照组中表达差异的基因，其中，与肿瘤干性相关基因的分析结果如下：与对照组相比，PMP22敲减组中IKBKB、MAML1、DDR1、NOTCH1、FLOT2明显下调。
结论：
1.通过无血清微球体悬浮培养可富集胃癌干细胞，并且胃癌干细胞中PMP22表达升高。
2.通过流式细胞术可有效分选PMP22+细胞。PMP22+细胞有较强的胃癌细胞干细胞特性，即多向分化能力、自我更新能力、快速增殖能力和耐药能力。
3.在胃癌细胞中敲减PMP22的表达可明显抑制胃癌细胞的干细胞特性，即自我更新能力、快速增殖能力、耐药能力和体内成瘤能力。
4.在胃癌MGC-803细胞水平中证实，PMP22+细胞具有胃癌干细胞的生物学特性。PMP22可能为胃癌干细胞的表面标志物。