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目的：MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码的单链RNAs，约由21～25个核苷酸组成。众多研究表明miRNAs能通过调控细胞增殖、凋亡、分化等参与疾病的发生发展进程，如肿瘤及心血管疾病。但有关缺氧性肺动脉高压中miRNAs的研究尚未见报道。我们前期通过miRNAs芯片已发现慢性缺氧大鼠的肺动脉血管中某些miRNAs表达呈显著变化，其中mieroRNA 328(miR-328)显著下调。本课题旨在揭示miR-328在缺氧性肺动脉高压中的作用及其调控机制。
方法：1.利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)，验证慢性缺氧大鼠肺动脉血管中miR-328的表达水平，并检测其在各血管中表达的组织特异性。2.利用原位杂交技术，确定miR-328在肺动脉高压患者(PAH)及慢性缺氧大鼠肺动脉血管中的细胞定位。3.利用腺病毒感染及基因转染技术，构建miR-328过表达及敲除的细胞和离体组织模型，并用qRT-PCR技术检测模型的有效性。4.利用小鼠右心室收缩压(RVSP)测定法、组织浴漕血管张力测定法、苏木精-伊红(HE)染色法，从整体、组织水平明确miR-328在缺氧肺血管收缩和缺氧肺血管重构的作用。5.利用生物信息学预测软件并结合相关文献，预测miR-328可能的靶基因。6.利用荧光素酶双报告基因技术（Luciferase活力测定），验证靶基因。7.利用MTT法、吖啶橙染色法、TUNEL、Western Blot技术，观察miR-328对凋亡的作用，并检测凋亡相关蛋白caspase 3前体(pro-easpase3)的变化。8.利用qRT-PCR、Western Blot技术，检测miR-328对靶基因转录、翻译水平的影响。
结果：1.PAH患者及慢性缺氧大鼠肺动脉血管中，miR-328均显著下调，且具有组织特异性，其表达主要定位于肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中。2.功能学实验表明miR-328能显著抑制肺动脉血管收缩及重构。3.筛选出miR-328的靶基因为编码L型钙通道alC亚基(CaV1.2)及胰岛素生长因子1受体(IGFlR)的基因。4.MiR-328能显著诱导PASMCs凋亡，表现为核皱缩，DNA片段化及pro-caspase3表达增加。阻断PI3K/AKT通路后，一定程度上逆转miR-328诱导凋亡的作用。5.MiR-328不仅能显著抑制IGFlR的转录及翻译水平，同时还能显著抑制CaV1.2的翻译水平，但对其转录水平无影响。
结论：以上结果表明，缺氧时miR-328的下调，直接致使其靶基因CaV1.2、IGFlR的蛋白表达上调，参与调控肺血管收缩和重构，从而引发缺氧性肺动脉高压。