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目的:通过对小鼠胚胎腭突上皮细胞的分离和体外培养,建立稳定良好的小鼠胚胎腭突上皮细胞原代培养方法;分离、培养小鼠胚胎腭突间充质细胞,观察其初级纤毛的情况,为后续小鼠胚胎腭突发育期间关键信号因子通过初级纤毛传递的实验研究奠定基础。方法:体式显微镜下剪取GD13.5的小鼠胚胎腭板,经0.4%Dispase II酶消化过夜后,机械分离上皮组织和间充质组织。1将上皮组织用0.05%胰蛋白酶消化,选择含5%FBS和5ng/ml EGF的Medium 171培养基进行培养,观察细胞形态及其生长情况,运用P-CK和Vim免疫细胞化学染色法对细胞类型进行鉴定;2将间充质组织用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA混合液消化,加入含有10%FBS的DMEM/F12(1:1)培养基中进行原代培养及传代,观察细胞形态及其生长情况,采用P-CK和Vim免疫细胞化学染色法对细胞类型进行鉴定,免疫荧光双标技术检测间充质细胞αα-tubulin和γ-tubulin的表达,观察其初级纤毛的情况。结果:应用Dispase II酶和胰酶双重消化法,结合机械分离可以获取纯度较高的小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞。镜下观察:1上皮细胞彼此紧密相连成片后呈典型的铺路石样,免疫细胞化学染色结果显示上皮细胞P-CK表达阳性;2间充质细胞呈梭形或多角形散在生长,免疫细胞化学染色结果显示间充质细胞Vim表达阳性,免疫荧光双标技术检测间充质细胞中αα-tubulin呈红色荧光、γ-tubulin呈绿色荧光,应用荧光显微镜成功观察到小鼠胚胎腭突间充质细胞上的初级纤毛结构。结论:1结合机械分离和酶消化法可用于小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞的分离及培养,并可获得纯度较高的小鼠胚胎腭突上皮细胞和间充质细胞。2小鼠胚胎腭突间充质细胞中有初级纤毛结构。