【摘 要】
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近半个世纪以来，变应性鼻炎(Allergicrhinitis，AR)和过敏性哮喘等过敏性疾病的发病率呈明显增加趋势，而且这种趋势是全球性的。这引起了世界卫生组织的高度重视，并将过敏性疾病列
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近半个世纪以来，变应性鼻炎(Allergicrhinitis，AR)和过敏性哮喘等过敏性疾病的发病率呈明显增加趋势，而且这种趋势是全球性的。这引起了世界卫生组织的高度重视，并将过敏性疾病列为二十一世纪需重点防治的三大疾病之一。而在众多的过敏原当中，尘螨是引起过敏性疾病的最主要的过敏原，其的主要种类为屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)和粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)两种。
自从1911年美国学者NOON和FREEMEN首先应用梯牧草花粉浸液治疗该花粉所致的变应性鼻炎取得成功以来，用过敏原初浸液来治疗过敏性疾病已成了常用的治疗手段。但由于天然变应原提取液的组分非常复杂，恒定其组分非常困难，且容易受外源性有毒物质、病原微生物的污染，影响其重复性与安全性。而重组变应原疫苗具有纯度高、无杂蛋白，易标准化，无外源性毒性物质和病原微生物污染的优势，临床上已有用于免疫治疗的报道。因此，利用基因重组的方法制备变应原，无疑为变态反应性疾病的诊断与治疗起到重要作用，而重组变应原的研究成为当今变态反应性疾病的研究热点之一。
通过RT-PCR方法分别扩增得到目的基因Derf6和Derf18片段，经测序表明它们与NCBI上公布的序列的同源性分别为96％和100％；目的基因分别亚克隆入表达载体pET24a(+)中，然后分别转化高效表达菌BL21star；IPTG诱导表达，获得了分子量分别31kD和52kD的重组目的蛋白，采用Ni+离子亲和层析的方法对两种重组蛋白进行纯化，并用透析和稀释复性法对纯化的蛋白进行复性处理；以尘螨过敏性患者的阳性混合血清为一抗，生物素标记的鼠抗人IgE为二抗，进行Westernblot印迹实验，结果表明重组表达的两个变应原都具有较好的IgE结合活性，这就为利用混合的重组变应原来诊治尘螨引起的过敏性疾病奠定了一定的基础。
Derfl基因的宿主表达菌经IPTG诱导表达后，对表达产物进行Ni+亲和纯化和复性处理，得到分子量约为25KD的高纯度的Derf1重组蛋白。重组蛋白Derfl经mPEG-MAL化学修饰后，对所得的修饰产物进行SDS-PAGE、Sephadex-G100分子筛、免疫印迹和酶联免疫实验(ELISA)分析。实验结果明，通过对Derfl蛋白进行mPEG-Mal化学修饰，获得了免疫原性显著降低的修饰产物Derf1-mPEG-Mal，为粉尘螨低致敏变应原的开发和研究奠定了一定的基础。
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