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本文采用滤纸片扩散法,测试了五十五株淡水真菌三种培养基发酵液的乙酸乙酯提取部位对四株病原细菌以及九株病原真菌的拈抗活性。抗细菌活性测试结果表明,从55株中筛选出23株淡水真菌在三种培养基培养条件下得到的样品对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus YMF3.19)、侧孢短芽孢杆菌YMF3.08(Brevibacillllus laterosporus)、大肠杆菌YMF3.16(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌YMF3.17(Staphylococcus aureus)均表现出活性,占所有菌株的41.8%。它们分属于Astrosphaeriella、Camposporium、Coelomycete、Dictyosporium、Dactylella、Fluminicola、Lasiosphaeria、Massarina,Melanospora、Monacrosporium,Periconia、Ophioceras、Phaeoisaria、Pseudohalonectria、Rosella、Torula、Xylomyces等17个属。抗真菌活性测试结果表明,Astrosphaeriella papuana YMF1.01181、Camposporium quercicola YMF1.01300、Dictyosporium cocophylum YMF1.01123、Dictyosporium musac YMF1.01216、Halosarpheia retorguens YMF1.00950、Ophioceras dolichostomum YMF1.00988、Torula herbarum YMF1.01021等六个属的七株菌活性最强。经综合分析,本文最终选择菌株O.dolichostomum YMF1.00988、C. quercicola YMF1.01300、A.papuana YMF1.01181为出发菌株,用PDB培养基进行放大培养,进一步分离、提纯和鉴定其活性代谢产物。
从淡水真菌O. dolichostomum YMF1.00988的PDB发酵液中分离获得化合物ophiocerol(1),isoamericanoic acid A(2)和caffeic acid(3),其中化合物1为一结构新奇的大环木质素。初步的活性测试表明化合物1-3具有中度的抗病原真菌活性,并且化合物1的活性明显高于化合物2和3。
从淡水真菌C. quercicola YMF1.01300的PDB发酵液中分离获得化合物quercilolin(4),tenellic acid A(5)和2’,4’-dihydroxyacetophenone(6)。其中化合物4为一个新的二苯醚。初步的活性实验表明,它们在浓度为200μg/滤纸片时,对革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用,但是对革兰氏阴性菌大肠杆菌没有任何活性,这其中的原因可能是由于革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的细胞壁成分不同,导致两种类型的细菌对化合物的敏感程度不同。
从淡水真菌A.papuana YMF1.01181的PDB发酵液中,我们分离获得化合物astropaquinone A-C(7-9),6-hydroxyl-2,4-dimethoxy-7-methylanthraquinone(10),其中化合物7-9为新化合物。从结构上看,化合物8和9为罕见的吡喃并萘醌骨架化合物。初步活性实验表明化合物7-10对松材线虫有微弱毒杀活性,作用时间为72h时,化合物7、8、9、10对松材线虫(B.xylophilus)的半致死率(LC50)分别为404.0ppm、213.9ppm、194.9ppm和333.7ppm。此外,化合物7-9对病原真菌和细菌还有中等的拮抗活性。