妊娠过程中γδT细胞时空变化与功能的研究

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γδT细胞在小鼠的外周血和淋巴组织中是很小的一个亚群,但是它们在炎症和免疫耐受的过程中发挥了和αβT细胞一样重要的作用,二十多年前人们就发现γδT细胞存在于子宫腔上皮附近,但是对它的功能至今研究较少。本文主要对妊娠过程中小鼠子宫中γδT细胞的时空变化及相应功能进行了研究。通过流式细胞术和免疫组化分析见栓前后子宫中的的中性粒细胞,发现小鼠交配后子宫出现大量的中性粒细胞,并且分布在腔上皮附近,同时见栓后小鼠子宫中白介素(Interleukin,IL)17A表达水平也显著上升。通过结扎小鼠模型和体外共培养实验证明IL-17A主要是由精浆激活的γδT细胞分泌的。使用中和抗体中和IL-17A可以显著降低见栓后子宫中中性粒细胞的数量,同时上皮细胞附近的中性粒细胞也有所减少,中性粒细胞募集相关的趋化因子(CXCL1,CXCL2和CXCL5)也随之降低。中和IL-17A并不影响子宫中Th1/Th2的平衡但是降低了促炎症分子IL-1β和TNF-α的表达。通过流式分析和测序比对发现表型为CD44hi的保守的Vγ6/Vδ1T细胞细胞大量聚集在植入前的子宫中,在之后的蜕膜化过程中蜕膜组织中γδT细胞占总T细胞的比例逐渐降低但蜕膜组织以外的子宫中并没有发生相应的变化。妊娠第八天腹腔注射细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)后,蜕膜以外的子宫中IL-17A的表达水平迅速上升。体内和体外实验均证明蜕膜以外的子宫和蜕膜组织中的γδT细胞均能够分泌IL-17A。综上,证明了γδT/IL-17途径可以介导精浆诱导的子宫的炎症反应,同时发现γδT细胞在围植入期发生了分布的变化并且具有分泌IL-17A的能力,这提示γδT细胞是子宫中IL-17A的重要来源。  为了研究蜕膜组织中自然杀伤细胞(Natural killer,NK)细胞的分化与功能,还在不同时间点(D6,D7,D9,D11)分选了不同亚群的NK细胞(CD45+CD3-CD122+CD49b-和CD45+CD3-CD122+CD49b+)进行转录组测序,妊娠第九天蜕膜组织中表型为 CD45+CD3-CD122+CD49b+和CD45+CD3-CD122+CD49b-的NK细胞与妊娠第七天相同亚群的NK细胞相比上调表达基因分别为2244个和2089个明显高于其它相邻时间点相同亚群上调基因数量,而下调基因却没有相应的变化。妊娠第十一天蜕膜组织中表型为CD45+CD3-CD122+CD49b+和CD45+CD3-CD122+CD49b-的NK细胞特异表达基因的数量分别为35和4个,妊娠的第六天蜕膜组织中表型为CD45+CD3-CD122+CD49b-的NK细胞存在7种特异表达的基因。这些变化可能与NK细胞的分化成熟相关。
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