Adiponectin AS lncRNA对前体脂肪细胞分化的作用及调控机制

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JK0803_liuchao
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长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是一类在基因表达过程中具有重要调控作用的非编码RNA,其可通过不同的作用方式参与多种生物学过程。脂肪组织的特异性分泌因子脂联素(Adiponectin)在前体脂肪细胞的分化和机体的正常代谢中发挥着重要的调节作用,其表达受转录及转录后调控;本研究通过生物信息软件预测了转录自脂联素基因反义链上的Adiponectin AS lncRNA的存在,探究了其对小鼠原代前体脂肪细胞分化的作用及机制,并研究了其对小鼠代谢的影响。本文首先应运生物软件分析了Adiponectin AS lncRNA的编码能力;通过RT-PCR鉴定了其在小鼠脂肪组织的转录;其次,利用RT-qPCR研究了其在小鼠不同组织和3T3-L1细胞系分化过程中的表达和半衰期;再通过FISH等技术确定了其在细胞中的定位;通过构建Adiponectin AS lncRNA腺病毒过表达载体侵染小鼠原代前体脂肪细胞,利用RT-qPCR、WB、油红O染色等技术研究了其对前体脂肪细胞分化的作用;再利用RPA等技术探究了Adiponectin AS lncRNA的作用机制;最后,利用过表达Adiponectin AS lncRNA的腺病毒注射C57BL/6小鼠,通过GTT、ITT、ELISA、RT-qPCR、TG检测等技术检测了其对小鼠糖、脂代谢的影响。获得的主要研究结果如下:1.Adiponectin AS lncRNA在小鼠心脏、肝脏、脾脏、脑、肾脏、肌肉和脂肪中均有表达,其在脂肪、肝脏及脾脏表达量相对较高;在3T3-L1成脂分化过程中,Adiponectin AS lncRNA的表达量随着分化的进行逐渐升高,在分化后期趋于稳定;2.Adiponectin AS lncRNA在前体脂肪细胞的核和质中均有分布,成熟脂肪细胞中荧光探针在细胞质中的荧光强度要高于细胞核中的荧光强度,Adiponectin AS lncRNA在脂肪细胞的分化过程中出现了由核到质的转移;3.过表达Adiponectin AS lncRNA显著抑制前体脂肪细胞成脂分化,下调成脂标志基因PPARγ、adiponectin和aP2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);Adiponectin AS lncRNA与Adiponectin m RNA通过碱基互补配对形成内源性的RNA二聚体,抑制Adiponectin m RNA的翻译;4.在高脂饲喂组,用表达全长和非重叠区的Adiponectin AS lncRNA腺病毒处理会降低小鼠的采食量,其脂肪的重量也显著低于对照组(P<0.05);非重叠区Adiponectin AS lncRNA腺病毒处理组与对照组及全长的Adiponectin AS lncRNA腺病毒处理组相比,其葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性更强;处理组小鼠的肝脏、肌肉、血液中甘油三酯的含量要显著低于对照组(P<0.05);处理组血液中的脂联素含量与对照组无显著差异,但处理组血液中瘦素的含量却显著低于对照组(P<0.05)。综上所述,Adiponectin AS lncRNA可以与Adiponectin m RNA之间形成RNA二聚体阻止其蛋白翻译,从而抑制前体脂肪细胞成脂分化;Adiponectin AS lncRNA在小鼠活体中的过表达可以抑制脂肪组织的增重,提升其葡萄糖耐受性和胰岛素敏感性,减少肝脏内甘油三酯含量,促进肝脏内胰岛素受体相关基因的表达。研究结果为探索脂肪沉积的lncRNA调控提供了新的候选基因,也为肉品质性状选育提供了科学依据。
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