兽疫链球菌发酵法生产透明质酸的研究

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透明质酸(hyaluronic acid)是由N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)和葡萄糖醛酸(GlcUA)通过β-1,4和β-1,3糖苷键反复交替连接而成的高分子聚合物。由于其自身特殊的理化性质,透明质酸在医学领域、化妆品领域和食品领域都有着广泛的应用。生产透明质酸主要有两种方法即从动物组织中提取和利用微生物发酵生产获得。由于动物组织的来源少,提取的数量有限,提取成本较高,因此透明质酸价格十分昂贵。而微生物发酵法可以利用微生物大量的生产透明质酸,且提取成本较低,具有更广阔的发展前景。本文以兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicusSL-1)作为出发菌株,对其进行紫外诱变和亚硝基胍诱变处理,得到了一株透明质酸产量较原始菌株提高55.17%的变异株SL-2。对菌株SL-2种子培养条件进行优化,最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是酵母粉和蛋白胨,摇瓶转速是150r/min,温度为37℃。应用正交试验设计法得出发酵培养基最佳配比为葡萄糖40g/L、牛肉膏4g/L、酵母粉7g/L、蛋白胨9g/L、MgSO4·7H2O2.5g/L、KH2PO42.2g/L。发酵温度为35℃,摇瓶装液量为100mL/500mL,透明质酸的产量为0.5066g/L。本文建立的透明质酸分批发酵动力学模型在葡萄糖初始浓度变化较大的范围内能够较好的描述Streptococcus zooepidemicus SL-2分批发酵过程中菌体的生长、产物形成和基质消耗随时间变化的状况。对发酵动力学方程及参数进行分析,得出透明质酸发酵存在一最佳的初糖浓度范围,即30~60g/L,从实际小罐发酵情况来看,推断结果是正确的。综合考虑乳酸对透明质酸发酵的影响、发酵周期、转化速率及转化率,选择了初糖浓度为45g/L进行发酵条件优化。通过对兽疫链球菌Streptococcus zooepidemicus SL-2在5L发酵罐中发酵生产透明质酸进行研究可知,透明质酸在初糖浓度为45g/L时最佳发酵条件是: pH为6.9,温度34℃,转速600r/min,通气量1.5L/min。同时对透明质酸的转化率以及转化速率进行了计算,转化率为9.68%,转化速率为0.197g/(L h)。
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