【摘 要】
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利用酶切、重组,将对病毒病具有广谱抗性的美洲商陆抗病毒蛋白基因α-PAP正向插入到质粒PBI121的35S启动子之下,构建了植物双元表达载PBI121/α-PAP菌株.通过电脉冲转化法将
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利用酶切、重组,将对病毒病具有广谱抗性的美洲商陆抗病毒蛋白基因α-PAP正向插入到质粒PBI121的35S启动子之下,构建了植物双元表达载PBI121/α-PAP菌株.通过电脉冲转化法将该重组质粒引入大肠杆菌DH5α及农杆菌LBA4404菌株,改进和建立了较大质粒(>10kb)转化农杆菌的高效电脉冲转化体系,即电场强度18kv/cm,电容25μF,电阻200Ω.利用农杆菌介导转化法将α-PAP基因转入烟草K326及其单倍体,获得了卡那霉素(km)抗性并经PCR检测鉴定的转基因植株. 改进建立了利用农杆菌系统转化烟草的高效转化体系,在诱导芽分化的培养基中,激素仅使用2mg/l6-BA, 不用组配其它激素.为烟草广谱抗病毒的基因工程育种提供了一条新途径.
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