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目的:建立可准确定量Survivin基因表达水平的实时荧光定量RT-PCR方法,研究它在乳腺癌(BC)组织中的表达及其与临床病理特征的关系;同时研究Survivin与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性,探讨他们在乳腺癌发生、发展中的作用及其临床应用价值。
方法:利用所建方法,分别检测39例乳腺癌癌组织及其部分(17例)癌旁组织、5例乳腺良性肿瘤组织中Survivin的表达水平,同时采用SP免疫组织化学染色法检测这些患者癌组织中VEGF的表达情况。SPSS统计软件分析两项指标间的相关性及其与临床病理诸参数之间的关联。
结果:
1、方法学灵敏度可达到150拷贝survivin mRNA/μg总RNA。
2、Survivin在乳腺癌癌组织和对照组(癌旁组织和良性肿瘤组织)中的平均表达水平(拷贝数/μg总RNA)分别为397,788±507109和73,095±85993,乳腺癌组明显高于对照组;Survivin在乳腺癌癌组织中的阳性表达率为87.2%(34/39),对照组阳性表达率为50%(11/22),两组之间差异也具有统计学意义。
3、VEGF蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为82.1%(32/39),在乳腺良性肿瘤组织及癌旁组织中未见表达(0/22),两组间差异有统计学意义。
4、Survivin基因与VEGF蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关。
5、乳腺癌肿块≤2cm者,其Survivin的表达水平明显高于肿块>2cm者。
6、Survivin的表达水平在癌浸润2-3级者明显高于癌浸润1级者。
7、淋巴结转移者Survivin的表达水平明显高于无淋巴结转移者。
8、VEGF阳性表达率也与肿块大小、浸润级别显著相关,而与淋巴结是否转移之间的关系在统计学上处于边界状态。
结论:
1、利用实时荧光RT-PCR技术结合“外标准曲线+内对照”的定量方式,建立了Survivin mRNA表达水平的定量检测新方法,具有良好的敏感性和特异性且结果直观而可靠。
2、Survivin在乳腺癌组织中的表达水平明显增高,而在癌旁组织和乳腺良性肿瘤组织中低表达,提示该基因可能参与乳腺癌的发生发展。
3、Survivin与肿块大小、癌浸润分级及腋淋巴结转移相关,说明其也参与了乳腺癌浸润和转移的过程,可为乳腺癌的临床分期和转移预测提供有用信息。
4、Survivin和VEGF表达呈正相关且在乳腺癌病程发展中具有协同性作用,可以联合应用作为乳腺癌治疗的新分子靶点,值得进一步研究。