论文部分内容阅读
Prox1(a prospero-related homeobox transcription factor)是果蝇prospero基因的同源物，它在眼球、视网膜、肝、胰以及淋巴管等器官和细胞类型的形成过程中起着重要的作用。目前，对Prox1作用机制的了解还处在起步阶段。一些前期的研究结果显示Prox1能与核受体LRH-1相互作用并抑制LRH-1靶基因如CYP7A1和SHP的表达，然而Prox1辅抑制因子的活性是怎样被调节的还不清楚。 小泛素样蛋白SUMO能共价连接到许多蛋白上，包括启动子特异的转录因子、辅因子以及染色质修饰酶等调节基因表达的重要蛋白，从而影响基因表达的不同方面。本文第一部分的工作对Prox1的SUMO修饰(sumoylation)情况以及SUMO修饰对Prox1辅抑制因子活性的影响进行了探讨。首先证明细胞内Prox1蛋白存在SUMO修饰，并发现Prox1蛋白的转录抑制活性区存在多个SUMO-1修饰位点。进一步的研究结果表明SUMO修饰干扰了Prox1的转录抑制能力，蛋白免疫共沉淀实验结果表明Prox1的SUMO修饰降低其招募HDAC3的能力，染色体免疫共沉淀实验结果证明SUMO修饰影响Prox1对HDAC3的招募可能是导致Prox1对内源靶基因转录抑制活性降低的原因。 Prox1基因敲除的小鼠其肝脏明显异常，提示它对于肝脏的早期形成有着重要的作用。Prox1基因敲除的小鼠肝细胞的增殖和迁移都受阻，胚胎14.5天肝脏明显小于正常小鼠，而且肝细胞仍成簇分布，被连续的laminin丰富的膜包裹。其中细胞粘附分子E-cadherin的表达异常升高被认为是影响肝脏细胞早期迁移，进而导致肝脏过小的重要原因。 在本论文的第二部分中，我们发现在HepG2肝癌细胞株中如降低Prox1的表达可使E-cadherin的表达明显升高。报告基因分析显示Prox1在转录水平抑制E-cadherin启动子的表达。虽然已知的几个诱导上皮细胞向间叶细胞转变过程的发育调节因子都通过与E-cadherin启动子区近端特异的E-box相互作用而抑制E-cadherin的转录，但是Prox1对E-cadherin启动子活性的抑制却不是通过E-box来实现的。Prox1对E-cadherin表达抑制的具体机制以及其在肝癌发生、转移中的作用有待进一步的研究。 本论文所述的研究结果揭示了调节Prox1辅抑制因子活性的新机制。也为Prox1在肝脏细胞迁移中的作用提供了进一步深入研究的线索。