微生物法生产亚氨基二乙酸的研究

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亚氨基二乙酸在农药、电镀、水处理、化学、医药等行业具有重要的应用,尤其是在农药行业,是生产除草剂草甘膦的一种中间化学品。   目前,生产亚氨基二乙酸的方法主要为化学法,但化学法需要在强酸、强碱、高温、高压等条件下进行,且环境污染严重,而生物法具有条件温和、流程简单、环境污染小等优点,因此,本论文采用微生物法生产亚氨基二乙酸。   本论文首先对紫红红球菌催化生产亚氨基二乙酸的催化条件进行了研究,确定了最适pH值为7.5、最适温度为45℃、最适底物浓度为52.6mM。考察了单批次催化,产物积累量可达88g/L。   此外,本论文还利用海藻酸钠-聚乙烯醇包埋法固定紫红红球菌细胞,最适的固定化条件为:海藻酸钠的质量浓度为10mg/mL,聚乙烯醇的质量浓度为50mg/mL,氯化钙的质量浓度为20mg/mL,固定化时间20小时,包埋量为9.6mg/mL。   本论文基于本实验室构建的重组菌BL21(DE3)pET-Nit,利用易错PCR方法对腈水解酶酶分子进行定向改造,改造后酶活力提高了0.5U/mL。考察了突变酶的催化特性,确定了最适pH值为8.0,最适催化温度为40℃,最适底物浓度为42mM。其酶学特性与突变前的腈水解酶相同。
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