【摘 要】
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香蕉是一种典型的呼吸跃变型水果,它的成熟要经历一个采摘后的包括内源或外源乙烯参与的信号转导过程。而ROP蛋白是植物体内一类重要信号转导蛋白,它通过与细胞膜的结合调控
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香蕉是一种典型的呼吸跃变型水果,它的成熟要经历一个采摘后的包括内源或外源乙烯参与的信号转导过程。而ROP蛋白是植物体内一类重要信号转导蛋白,它通过与细胞膜的结合调控着许多重要的细胞活动,如细胞的运动、形态的发育、宿主细胞的防御、细胞的分裂和基因的表达。同时我们实验室从抑制差减文库中获得了香蕉中的一个ROP基因片段,并且通过芯片的分析表明它可能与果实的成熟相关。所有这一切都说明了进一步研究该基因是非常必要的。根据已知SSH片段设计引物,采用RACE-PCR的方法从香蕉果实双链cDNA文库中克隆了一个命名为Marop1,长为720bp的片段。进行Blastx比对后发现它与其他物种的ROP基因的同源性很高。进行保守结构域的分析发现,Marop1含有一个非常保守的ROP结构域。经Genscan分析后发现,Marop1含有一个完整的阅读框,共编码196个氨基酸。Southern杂交表明,Marop1在香蕉基因组中的拷贝数较低。为了研究Marop1的表达,我们根据对乙烯释放量的测定结果选取了采后0天,2天、6天、10天、12天和14天的材料提RNA,并反转录为cDNA进行Marop1在转录水平上的表达分析。同时也将香蕉的根、茎叶和花作为表达分析的材料。RT-PCR的结果表明其在香蕉的根、茎、叶、花、果中均有表达,而在果中的表达情况为0天的较高12天的表达量最高。根据其表达量的变化,推测Marop1可能与果实的成熟有关特别是乙烯的产生——有可能是乙烯的上游调控因子。此外为了更好地解Marop1在香蕉果实成熟中的功能,本实验中构建了pET-30a- Marop1,并进行了诱导表达,包涵体的纯化,切胶制备抗原以及免疫了新西兰大白兔制备了Marop1的多克隆抗体。经ELISA、Western检测抗体效价较高(>10000)、比较特异。也为进一步深入地研究其生物学特性及功能奠定了基础。
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