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一、研究背景和目的 乳腺癌是一种异质性的疾病，居女性肿瘤相关死亡率第二位，包括了大量各种不同的临床特征。在过去的十年中，大量研究证实乳腺癌可分为多个分子亚型:luminalA亚型、luminal B亚型、HER2过表达亚型、基底细胞样亚型和正常细胞样亚型或更多分子亚型。其中，Luminal亚型的基因表达主要与雌激素受体(ER)和/或孕激素受体(PR)阳性的表达相关;HER2过表达亚型表现为HER2受体的过表达以及邻近基因17q12-21的扩增;基底样亚型是由基底/肌上皮标记表达来定义且普遍缺乏ER、PR和HER2的表达。重要的是，不同分子亚型有特定的mRNA表达谱，这些特定的mRNA表达谱部分归因于不同的miRNA的表达。有研究通过将乳腺癌与癌旁组织进行对比，揭示了乳腺癌组织中miRNA失调的普遍模式，提示了在乳腺癌的发展中miRNA失调的重要性。miR-429属于一个miRNA家族，该家族包括miR-200c、 miR-141、miR-200b和miR-200a。miR-429在生物体内发挥着正常的生物学功能，特异性地表达于人类胚胎干细胞中，但同时其异常表达也参与影响肿瘤干细胞和各种肿瘤的功能，但其在乳腺癌中的表达情况及功能情况尚未见报道。本研究中，发现在人乳腺癌Bcap37细胞系中miR-429的表达低，进一步的研究表明miR-429的过表达促进人乳腺癌Bcap37细胞的增殖和迁移，进而促进乳腺癌的发展和转移。 二、研究方法 1.利用Realtime-PCR探针法检测人乳腺癌细胞系BT20、BT474、Bcap37、SK-BR-3、MCF7、T-47D和MDA-MB-231中miR-429的表达情况，从中选择出miR-429表达最低的细胞系; 2.通过hsa-miR-429过表达慢病毒和对照病毒转染Bcap37乳腺癌细胞，建立稳定过表达miR-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系; 3.利用RT-PCR探针法检测过表达miR-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系中miR-429的表达情况，确定转染效率; 4.稳定过表达miR-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系分别采用MTT法、划痕实验、Transwell实验等方法观察表达miR-429后对人乳腺癌细胞系Bcap37增殖、迁移、转移能力等生物学特性的影响; 5.利用Realtime-PCR探针法检测稳定过表达miR-429的人乳腺癌细胞系Bcap37及其对照细胞系对Shp2、FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相关mRNA转录水平的影响。 三、研究结果 1.利用Realtime-PCR探针法检测结果显示:miR-429在乳腺癌细胞系都有不同程度表达，BT20和T47D细胞系表达量最高，BT474、SK-BR-3、MCF7和MDA-MB-231细胞系表达量相当，而miR-429在Bcap37细胞中表达量最低; 2.将hsa-miR-429过表达慢病毒感染人乳腺癌Bcap37细胞，经筛选后得到hsa-miR-429过表达Bcap37稳转细胞株。利用Realtime-PCR探针法检测结果显示，与对照组相比，hsa-miR-429过表达稳转Bcap37细胞株中miR-429的表达水平显著增加; 3.MTT法检测MiR-429过表达处理对细胞增值的影响。培养24h、48h、72h后，Bcap37细胞过表达MiR-429组的在490nm处的吸光度均明显高于与对照组，说明miR-429能显著促进Bcap37细胞的增殖; 4.划痕实验显示，与对照组相比， hsa-miR-429过表达稳转Bcap37细胞株的迁移能力显著增强;Transwell细胞迁移实验得到与上述类似的结果; 5.乳腺癌相关基因转录的差异:hsa-miR-429过表达稳转Bcap37细胞株中Shp2的相对表达水平高于对照组，而FBXW11、GLI3、RAP1B、CSNK1 G3、MAP3K5、MAP4K3、PPM1B等基因相关mRNA转录水平均低于对照组。 四、结论 目前研究表明，miRNA与家族性乳腺癌、雌激素相关受体、HER2、乳腺癌的复发转移以及相关化学治疗耐药等密切相关。本研究旨在研究miR-429对乳腺癌细胞生物学功能的影响。通过过表达miR-429探究了miR-429对人乳腺癌Bcap37细胞功能的影响。与之前的大多数研究基本一致，发现miR-429上调后能显著促进人乳腺癌Bcap37细胞的增殖;同时与对照的细胞相比，无论是划痕实验还是Transwell实验，过表达miR-429的Bcap37细胞具有更强的迁移能力。在此证明miR-429促进乳腺癌细胞的增殖及迁移，从而促进乳腺癌的发展、转移。