BT阿维菌素对棉铃虫雄蛾触角MicroRNAs的影响及靶基因预测

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触角是昆虫重要的感觉器官,在昆虫交配、繁殖、迁徙等活动中起着传递信息、感知外界环境的重要作用。触角内存在着大量与气味有关的蛋白,包括气味结合蛋白、气味受体、气味降解酶等,昆虫依靠这些蛋白和外界气味分子结合,经过一系列复杂的过程,从而做出各种生理反应。MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约为22nt的内源性非编码小分子RNA,通过与mRNA的碱基互补配对来调控基因的表达。棉铃虫(Helicoverpa armigera)是一种重要的农业害虫,成虫的交配和繁殖多发生在夜间。交配时雌蛾会释放出大量性信息素,雄蛾通过触角来感受这些气味分子然后进行繁殖。本论文对三组棉铃虫雄蛾触角miRNA(光期组MA_D,暗期组MA和幼虫期喂食亚致死剂量BT阿维菌素的BtA组)进行高通量测序和生物信息学分析,挖掘出新的miRNA,然后通过差异分析,进行miRNA靶基因预测和功能注释,以期能够发现雄蛾触角内与气味反应相关的miRNA和其靶基因,为人们了解昆虫嗅觉系统的过程以及棉铃虫的防治提供新的思路和理论依据。在三组测序结果的miRNA种类和表达量分布对比中,MA组和MA_D组大致相同,但BtA组在种类和数量上少于前两组,且读数在0-1次的低表达量miRNA只有10条。经过进一步的比对,发现BtA农药能明显降低棉铃虫雄蛾触角内miRNA的表达,且主要表现在低表达量的miRNA上。在表达量读数对比中,调控昆虫免疫系统的let-7家族miRNA在BtA组中上调显著,而let-7家族基因被证实能调控昆虫的免疫系统。所以,可以推断BtA农药通过改变let-7基因的表达影响棉铃虫雄蛾的免疫系统,而这在棉铃虫触角内是首次被发现的。另外两个家族的miRNA,mir-276和mir-1000在BtA组中显著下调,且这两个家族miRNA被证明大量存在昆虫大脑中,可能调控神经系统和视觉系统,推测mir-276和mir-1000的差异表达可能是引起棉铃虫雄蛾在行为上的差异的原因之一。通过靶基因预测和功能注释,发现和昆虫气味反应相关的miRNA总共有9条,其中包括2条新序列和7条保守序列,且都为表达量较高的miRNA。MA组和MA_D组对比中有4条miRNA的倍数变化在50%以上(一条在MA_D组中上调,另外三条在MA_D组中下调),结合以前对蛾类昆虫求偶、交配节律的研究,可以推测,这些miRNA可能调控雄蛾触角内某些基因的表达从而影响雄蛾对雌蛾释放的性信息素的接收。而BtA组比MA组倍数变化在50%以上的则有8条,几乎所有跟气味相关的miRNA都在这两组中的表达量具有差异,其中包括一条重要的miRNA(预测调控多条气味相关的靶基因),mse-mir-252(CTAAGTACTAGTGCCGCAGGAG),在BtA组中读数上调,Log2(BtA/MA)值为0.61。
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