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论文以模式生物斑马鱼与黑青斑河豚为研究对象,进行了Th细胞标志分子克隆、功能研究及Th细胞的初步鉴定。
论文第一部分,利用特异性抑制T细胞活化的环孢霉素A,发现鱼类在针对胸腺依赖性抗原刺激时其B细胞产生抗体受到抑制,而对胸腺非依赖性抗原刺激应答正常。由此提示适应性免疫过程中的Th样的细胞调控机制及T-B淋巴细胞互作在鱼类已经产生.为提供进一步证据,我们同时在斑马鱼克隆了Th细胞亚群特异性转录因子THPOK,并利用其为标志分子对鱼类Th细胞进行了表型鉴定。
论文第二部分,在斑马鱼中克隆了介导高等动物Th细胞与B细胞互作的重要共刺激分子CD154与CD40的同源物,并探讨了两者对斑马鱼免疫功能的调控。CD154与CD40分子分布广泛并在接受胸腺依赖性抗原刺激后表达上调。体内试验证实,斑马鱼IgM的产生可被CD154抗体或可溶性CD40分子抑制,而可溶性CD154分子或CD154真核表达质粒可刺激IgM的产生。胸腺依赖性抗原诱导的CD154的表达可被T细胞特异性抑制剂CsA所抑制提示CD154在斑马鱼主要存在于T细胞。免疫荧光双标实验表明CD40与IgM共分布于淋巴细胞提示CD40在斑马鱼B细胞的表达。CD154-CD40结合实验证实二聚体形式的CD154分子可特异性结合CD40分子。综合以上实验结果,这部分研究证实CD154-CD40介导的T-B淋巴细胞互作在鱼类已经出现。
论文第三部分,利用生物信息学方法首次在斑马鱼与黑青斑河豚克隆了可用于鉴定Thl和Th2细胞亚群的TIM基因家族,同时进行了生物信息学分析,为进一步阐明TIM家族分子的进化、功能,以及鉴定鱼类Thl和Th2亚群的打下了基础。