水果表面生防酵母的分离鉴定及其对猕猴桃采后病害的防治研究

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在猕猴桃贮藏期间青霉病、灰霉病和黑斑病是主要的侵染性病害,会造成巨大的腐烂损失。一直以来,对于果蔬病害的防治多使用的是化学杀菌剂,也是病害防治的常见手段。但是由于农药残留对人体的危害、环境污染和以及病原菌产生抗药性等诸多缺点,急需一种健康安全的保鲜方法来取代化学杀菌剂的使用。生防酵母菌是一种新的防治手段,其产生的附属产品是对于人体没有伤害,并且对病原菌还具有拮抗作用,能有效的抑制病原菌的生长,是一种对果蔬采后病害防治的新途径。本研究针对于分离、筛选出能够抑制果实采后病害的拮抗菌株,鉴定其生物学特性,并测定所筛选出的菌株李1(李子果皮分离),葡1(葡萄果皮分离)和山2(山竹果皮分离)对青霉病、灰霉病和黑斑病的抑制效果,以及在果实伤口的繁殖情况,并对其防治机理进行初步探讨。主要结果如下:1、拮抗菌的分离和筛选:用无菌水分离的方法从不同水果表面分离出拮抗酵母菌,再用稀释平板法,对分离出的酵母菌进行纯化。结果筛选出对青霉菌(Penicillium expansum)具有明显抑制效果的27株酵母菌。2、拮抗菌的鉴定:先根据酵母菌的形态特征进行初步区分,进而采用ITS序列的鉴定,通过同源性比对及系统发育分析,鉴定拮抗菌李1为果假丝酵母菌(Candida fructus)、葡1为特立科拉毕赤酵母菌(Pichia terricola)、山2为仙人掌有孢汉逊酵母菌(Hanseniaspora opuntiae)。猕1(猕猴桃果皮分离)为雷氏假丝酵母(Candida railenensis)、猕2(猕猴桃果皮分离)为地霉属酵母样真菌(Galactomyces geotrichum)、猕3(猕猴桃果皮分离)为汉森酵母(Hanseniaspora meyeri)。3、拮抗菌的抑菌试验:将浓度为1x10~7CFU/mL的拮抗酵母菌李1、葡1和山2接种到红阳猕猴桃上,放置于25℃培养箱中,李1、葡1和山2对青霉菌有着显著的抑制效果,发病率分别为43.33%、40%、30%,对照组无菌水和青霉菌发病率100%。李1、葡1和山2对灰霉菌(Botrytis cinerea)有着显著的抑制效果,发病率分别为30%、23.33%、30%,对照组无菌水和灰霉菌发病率100%。李1、葡1和山2对链格孢菌(Alternaria alternata)有着显著的抑制效果,分别发病率为6.67%、6.67%、10%,对照组无菌水和链格孢菌发病率100%。将浓度为1x10~7CFU/mL的拮抗酵母菌猕1、猕2和猕3接种于智利猕猴桃上,放置于25℃培养箱中,对于青霉菌、灰霉菌和链格孢菌有着明显的抑制效果,其发病率分别为80%、80%、86.67%,53.33%、56.67%、60%,16.67%、30%、26.67%。将浓度为1x10~7CFU/m L的拮抗酵母菌李1、葡1和山2接种到青苹果上放置于25℃培养箱中,对于青霉菌、灰霉菌和链格孢菌有着明显的抑制效果,其发病率分别为20%、10%、10%,6.67%、10%、10%,10%、6.67%、10%。对照组无菌水和病菌发病率均为100%。4、拮抗菌的种群数量生长速度:拮抗酵母菌李1、葡1和山2在有无青霉菌、灰霉菌和链格孢霉菌作用的情况下都能够在果实伤口迅速生长繁殖。接种在红阳猕猴桃上的酵母菌在第一天的时间里迅速繁殖,在之后的时间段里趋于较为稳定。5、用1×10~7CFU/m L的酵母菌李1、葡1和山2接种于红阳猕猴桃中,按0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h分别提取出来检测其CAT(过氧化氢酶)、SOD(总超氧化物歧化酶)、POD(过氧化物酶)和总酚酶都有显著的提高,说明三种酵母菌都能诱导猕猴桃果实产生抗病性。
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