【摘 要】
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脂联素是由脂肪组织特异表达的细胞因子,分泌后进入血液循环,调节体内能量代谢.脂联素球状区在体内独立存在,成脂联素功能相似.虽然由脂肪组织特异表达,但是当动物脂肪过度沉
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脂联素是由脂肪组织特异表达的细胞因子,分泌后进入血液循环,调节体内能量代谢.脂联素球状区在体内独立存在,成脂联素功能相似.虽然由脂肪组织特异表达,但是当动物脂肪过度沉积时脂联素表达及血液脂联素水平反而下降.另外,2型糖尿病、一些心血管疾病患者中的血液脂联素水平很低,而增加体内脂联素有助于这些疾病的改善.研究证实脂联素能增强胰岛素敏感性并有一定的抗炎症功能.该文以猪为研究对象,旨在建立猪体内脂联素表达量的检测方法.首先用RT-PCR扩增脂联素编码区和球状区,构建pGEX-Adiponectin和pGEX-gAdiponectin表达载体,转化到BL21(DE3)中进行表达,得到猪脂联素GST融合蛋白及脂联素球状区GST融合蛋白.然后用重组蛋白免疫新西兰白兔而产生兔抗猪抗血清.其次建立了半定PCR方法研究瘦肉型和脂肪型猪脂联素表达差异.半定量PCR要求PCR扩增在指数期进行,所以先要摸索指数期循环数,发现在25~29个循环脂联素和β-actin均处于指数期.以27为最终循环数进行半定量PCR,结果显示瘦肉型猪的表达量高于脂肪型.第三建立了竞争性PCR方法对长白猪脂联素mRNA进行绝对定量.用限制性内切酶Ava I处理脂联素编码区,回收N端267bp和C端372bp片段,连接,然后进行PCR扩增,从而得到竞争性模板.对竞争性模板进行稀释,与猪脂联素cDNA进行竞争性PCR反应,通过分析PCR产物计算出长白猪脂肪组织中脂联素mRNA的含量.最后应用辐射杂种细胞系技术将猪脂联素定位在13号染色体.
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