【摘 要】
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食管癌的发生发展与多种癌基因、抑癌基因改变有关,但尚未发现与食管癌有高度相关的基因。为了探索新的食管癌相关基因,本室用mRNA差异显示技术与5’-RCAE(Rapid Amplification
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食管癌的发生发展与多种癌基因、抑癌基因改变有关,但尚未发现与食管癌有高度相关的基因。为了探索新的食管癌相关基因,本室用mRNA差异显示技术与5’-RCAE(Rapid Amplification of cDNA Ends)方法从正常人食管上皮与高癌家族的食管癌组织中分离与克隆出四个基因片段,序列同源比较为未知新基因,并获得了其中一个基因片段的全长cDNA序列,命名为食管癌相关基因-1(Esophageal Cancer Related Gene-l,ECRG-1)。本论文旨在研究ECRG-1基因所编码蛋白质的结构与功能。为此,我们从以下几个方面进行了研究。 1.ECRG-1基因编码蛋白质的结构与功能分析及其三维结构的模建:应用生物信息学(Bioinfomatics)方法分析了ECRG-1基因编码蛋白质的性质与结构,进行蛋白质同源序列比较,预测其功能并模建该蛋白质的三维结构。结果表明ECRG-1基因编码蛋白质是一个跨膜蛋白,分子量为45kD,与丝氨酸蛋白酶同源性较高,推测ECRG-1基因编码蛋白质的功能与细胞形态及其生长有关。以丝氨酸蛋白酶(Serine Protease)晶体结构为模板,利用同源模建原理,从理论上设计了ECRG-1基因编码蛋白质的三维结构。 2.ECRG-1基因编码蛋白质在原核细胞中的表达:应用RT-PCR方法克隆与分离出ECRG-1基因的蛋白编码区序列,经测序与5’-RCAE钓取的序列相符合。以质粒pGEX-4T-1为表达载体,在大肠杆菌中诱
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