三种猪用疫苗GMP生产工艺技术的研究

• 作 者: 张毓金
• 机 构: 华南农业大学
• 出 处: 华南农业大学
• 发表日期: 2006年期
• 关键词: 猪瘟疫苗 猪伪狂犬病疫苗 猪链球菌疫苗 GMP 疫苗生产工艺

本研究是以目前猪用主要疫苗猪瘟细胞培养活疫苗、猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗与猪败血链球菌C群ST171株活疫苗的生产为范例，对细胞培养、鸡胚成纤维细胞培养、发酵培养三个不同工艺技术培养毒(菌)株的研究，重点研究主要原材料对兽用生物制品半成品、成品质量的影响，制定原材料内控质量标准；研究病毒、细菌大规模培养新工艺，通过采用独特疫苗生产工艺，提高半成品的病毒含量、细菌培养液的有效细菌数，生产出安全性好、效价高、质量稳定的猪用疫苗。
猪瘟细胞培养活疫苗生产工艺技术研究结果表明，不同品质实验兔对接种猪瘟疫苗弱毒定型热反应率80.0～93.33％，差异显著；猪瘟疫苗生产过程中进行牛睾丸常规病毒检验、专有牛腹泻病毒荧光抗体方法与PCR方法双重检验，牛睾丸细胞培养病毒液效价≥1×105RID/mL：采用病毒中和试验、病毒生长试验，严格筛选出高标准的犊牛血清，猪瘟疫苗病毒培养液毒价≥1×105RID/mL。检验兔舍室温、检验兔不同来源、猪瘟抗体阳性兔对猪瘟活疫苗半成品、产成品质量均有较大影响，研究规范了检验动物的质量标准；采用新工艺技术与效价水平的疫苗临床应用显效果表明，不同效价的疫苗免疫效果差异显著，免疫猪只的母源抗体水平对疫苗免疫效果有较大干扰，效价≥1×105RID/mL的疫苗，免疫效果确切。
猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗生产工艺技术研究结果表明，细胞培养过程采用提前接毒的关键工艺，能显著提高培养液病毒效价，效价达2×106.75TCID50；不同效价的疫苗田间免疫效果差异显著，接种猪的母源抗体水平对疫苗免疫效果有较大干扰，按新工艺与高效价配制的疫苗1对不同母源抗体水平的猪均能达到确切的免疫效果。
猪败血链球菌C群ST171株活疫苗生产工艺技术研究结果表明，在自动细菌发酵生物反应器采用干粉培养基培养，培养菌数达到2.65×109CFU/mL，完全可以替代牛肉汤培养基；得出疫苗菌株发酵、保存、冻干活菌数变化曲线，生产过程提供技术论据；按新工艺与质量标准配制的疫苗，对非免疫猪安全，攻毒保护试验免疫猪100％保护。
本项目根据相对比较系统的研究，制定出猪瘟细胞培养活疫苗、猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗、猪败血链球菌C群ST171株活疫苗生产原材料内控质量标准，对关键生产工艺技术进行了改进与细化，提出检测生产与检验实验兔抗猪瘟抗体、对牛血清进行各疫苗病毒生长试验、采用PCR快速检测BVDV筛选牛睾丸等质量控制措施与检测方案；采用全自动细菌生物反应器与干粉培养基培养猪败血链球菌C群ST171株活疫苗，培养菌数显著提高。研究初步确定原材料、半成品、成品的内控新质量标准，提出生产与检验过程中质量控制方案。
本研究还针对目前猪瘟细胞培养活疫苗、猪伪狂犬病gE基因缺失活疫苗与猪败血链球菌C群ST171株活疫苗生产工艺技术存在的问题，提出了解决措施与办法，提出生产工艺技术发展的方向，对行业有积极的参考意义。