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目的:筛选马兜铃酸Ⅰ致急性肾损伤新型生物标志物。本课题首先是以马兜铃酸Ⅰ建立大鼠急性肾损伤模型，通过microRNA芯片表达谱分析，筛选马兜铃酸Ⅰ致急性肾损伤时表达显著性变化的miRNAs，从而进一步筛选血浆及尿液中肾损伤特异性相关的miRNAs，并通过含马兜铃酸的中药制剂验证急性肾损伤时筛选出的miRNAs的稳定性及可靠性，从而确定早期潜在的马兜铃酸Ⅰ急性肾损伤生物标志物，为临床含马兜铃酸Ⅰ的中药致急性肾损伤的诊断及治疗提供参考。 方法:Wistar雄性大鼠经腹腔注射10、20及40mg/kg体重剂量马兜铃酸Ⅰ，连续给药6天，建立急性肾损伤模型。根据病理组织学检查结果，挑选40mg/kg剂量组D2、D4、D6以及对照组D6大鼠肾脏进行miRNAs芯片表达谱分析，筛选急性肾损伤时表达显著性变化的miRNAs，并通过实时定量PCR验证后进一步检测其在不同剂量马兜铃酸Ⅰ处理组D2、D4及D6血浆及尿液中的表达水平以及非靶器官脑、心、肝脏中的表达，以确定特异性的马兜铃酸Ⅰ致急性肾损伤早期潜在的新型生物标志物。 进一步鉴定筛选的miRNAs可靠性实验则是通过含马兜铃酸Ⅰ的中药关木通制备浸膏制剂，连续6天经口灌胃雄性Wistar大鼠，实验结束，采集肾脏进行病理组织学检查，血浆和/或尿液经实时定量PCR检测筛选出的miRNAs表达变化，从而确定其是否是可靠的马兜铃酸Ⅰ诱导的急性肾损伤早期的潜在新型生物标志物。 结果:马兜铃酸Ⅰ动物实验结果提示D2时血浆40mg/kg剂量组D2至D6尿素氮(BUN)显著降低(p＜0.05或p＜0.01)，病理组织学检查见40mg/kg剂量D43例、D6所有大鼠肾脏皮髓交界处轻度至中度肾小管变性，上皮单细胞坏死，20mg/kg剂量组D6见3例大鼠肾脏皮髓交界处轻度的肾小管变性，上皮单细胞坏死。实验结果表明马兜铃酸Ⅰ致急性肾损伤模型成功建立。40mg/kg剂量组所有实验动物及D6对照组大鼠肾脏miRNAs芯片表达谱检测提示在马兜铃酸Ⅰ致急性肾损伤时，其中21个miRNAs经方差分析提示(ANOVA) p＜0.05，至少其中的两组比较FC≧2，挑选其中D2至D6持续增加且均满足FC≧2、p＜0.05的5个miRNAs(rno-miR-465-5p,rno-miR-23a-5p,rno-miR-551b-5p,rno-miR-21-3p，rno-miR-466b-2-3p)，经qRT-PCR在肾脏组织进行进一步验证。结果提示仅rno-miR-21-3p在D4及D6表达仍明显上调。因此，检测所有实验动物血浆、尿液及非毒性靶器官脑、心、肝中rno-miR-21-3p的表达水平。相比于对照组，自D2开始，20和40mg/kg剂量组rno-miR-21-3p明显上调，D4开始，10mg/kg剂量组血浆rno-miR-21-3p显著上调表达(p＜0.05，p＜0.01，p＜0.001)，且D4时，相比于D2，10和20mg/kg剂量组表达明显升高(p＜0.01)。非毒性靶器官脑、心及肝脏中rno-miR-21-3p的表达相比于对照组，均呈下调趋势，其中心和肝脏的rno-miR-21-3p表达明显下降(p＜0.01，p＜0.001)。 关木通浸膏制剂可靠性实验结果显示Wisatar雄性大鼠经口灌胃89mg/kg剂量的马兜铃酸Ⅰ6天，病理组织学检查见肾脏皮髓交界处肾小管轻度上皮变性，上皮单细胞坏死，血浆rno-miR-21-3p表达明显上调(p＜0.01)。 结论:雄性Wistar大鼠经腹腔注射马兜铃酸Ⅰ，连续给药6天，成功建立马兜铃酸急性肾损伤模型。血浆miR-21-3p在20及40 mg/kg剂量水平D2即明显上调，10mg/kg在D4开始明显上调。miR-21-3p上调表达较临床生化指标血清肌酐、尿素氮的改变敏感，同时也早于肾小管病理组织学变化，且在肾小管损伤发生之前呈上升趋势。含马兜铃酸的中药关木通浸膏经口给药后，血浆miR-21-3p表达显著升高，由此可见miR-21-3p对马兜铃酸所致的急性肾损伤，具有良好的敏感性，稳定性，且易于检测，因此可作为潜在的马兜铃酸急性肾损伤早期新型生物标志物。