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目的:建立大鼠心肌细胞与脐带间充质干细胞(hUMSCs)非接触共培养体系,观察共培养后心肌细胞中凋亡蛋白及培养液中多种细胞因子变化,探讨研究脐带间充质干细胞对于心肌细胞的作用,为临床应用提供理论依据。
方法:取新生大鼠心脏,培养获得心肌细胞,通过差速贴壁法提纯,与不同浓度第4代hUMSCs构建非接触共培养体系。实验分为6组,心肌细胞对照组、hUMSCs对照组、心肌细胞+hUMSCs上清组、心肌细胞+hUMSCs(1∶1)组、心肌细胞+hUMSCs(1∶2)组和心肌细胞+hUMSCs(1∶5)组。收集心肌细胞和培养液,应用ELISA检测各组凋亡蛋白及细胞因子浓度。
结果:培养上清液中各组组间比较HGF、SCF浓度均无明显差异(P>0.05),组内变化亦无统计学差异(P>0.05);组间比较IGF-1、TGF-β、VEGF浓度存在统计学差异(P<0.05),心肌细胞与hUMSCs共培养组IGF-1、TGF-β、VEGF浓度低于Myo-Control组,高于hUMSCs-Control组;组内IGF-1、VEGF浓度大致呈波浪式变化,存在统计学差异(P<0.05),组内TGF-β浓度大致呈下降趋势,存在统计学差异(P<0.05)。凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值组间变化存在统计学差异(P<0.05),培养第四天之前,Myo-hUMSCs1组最高,Myo-hUMSCs5组最低,其余各组在两组之间,第四天之后,各组间Bax/Bcl-2比值接近;组内比较各组Bax/Bcl-2比值大致呈逐渐上升趋势,存在统计学差异(P<0.05)。分析细胞因子与Bax/Bcl-2比值变化趋势之间的关系,发现IGF-1、VEGF浓度与Bax/Bcl-2比值变化大致呈负相关,TGF-β与Bax/Bcl-2比值变化大致呈正相关。
结论:体外培养条件下,hUMSCs抑制心肌细胞分泌IGF-1、TGF-β、VEGF,对HGF及SCF无明显变化。大量hUMSCs与心肌细胞共培养,可致心肌细胞Bax/Bcl-2比值下调。
方法:取新生大鼠心脏,培养获得心肌细胞,通过差速贴壁法提纯,与不同浓度第4代hUMSCs构建非接触共培养体系。实验分为6组,心肌细胞对照组、hUMSCs对照组、心肌细胞+hUMSCs上清组、心肌细胞+hUMSCs(1∶1)组、心肌细胞+hUMSCs(1∶2)组和心肌细胞+hUMSCs(1∶5)组。收集心肌细胞和培养液,应用ELISA检测各组凋亡蛋白及细胞因子浓度。
结果:培养上清液中各组组间比较HGF、SCF浓度均无明显差异(P>0.05),组内变化亦无统计学差异(P>0.05);组间比较IGF-1、TGF-β、VEGF浓度存在统计学差异(P<0.05),心肌细胞与hUMSCs共培养组IGF-1、TGF-β、VEGF浓度低于Myo-Control组,高于hUMSCs-Control组;组内IGF-1、VEGF浓度大致呈波浪式变化,存在统计学差异(P<0.05),组内TGF-β浓度大致呈下降趋势,存在统计学差异(P<0.05)。凋亡蛋白Bax/Bcl-2比值组间变化存在统计学差异(P<0.05),培养第四天之前,Myo-hUMSCs1组最高,Myo-hUMSCs5组最低,其余各组在两组之间,第四天之后,各组间Bax/Bcl-2比值接近;组内比较各组Bax/Bcl-2比值大致呈逐渐上升趋势,存在统计学差异(P<0.05)。分析细胞因子与Bax/Bcl-2比值变化趋势之间的关系,发现IGF-1、VEGF浓度与Bax/Bcl-2比值变化大致呈负相关,TGF-β与Bax/Bcl-2比值变化大致呈正相关。
结论:体外培养条件下,hUMSCs抑制心肌细胞分泌IGF-1、TGF-β、VEGF,对HGF及SCF无明显变化。大量hUMSCs与心肌细胞共培养,可致心肌细胞Bax/Bcl-2比值下调。