论文部分内容阅读
背景：
四跨膜蛋白（tetraspanins）是指一组异质的四次跨膜蛋白超家族群，其能够招募其他细胞表面受体和信号蛋白到四跨膜蛋白富集微区（tetraspanin-enrichedmicrodomains，TEMs)，参与细胞内外的信号转导通路调控。四跨膜蛋白的表达常与肿瘤阶段、肿瘤类型及患者的预后相关，对肿瘤既可能起抑制作用也可能起促进作用。在肿瘤细胞株里进行四跨膜蛋白表达的干扰会对相应的不同类型的四跨膜蛋白富集微区的功能造成影响，进而调控肿瘤细胞的生长、侵袭和转移能力。Tspan9（Tetraspanin9，NET-5，PP1057)是四跨膜蛋白超家族（transmembrane4superfamily，TM4SF)的成员之一，现已有报道其能够通过与其他四跨膜蛋白及相关分子的结合来调节血小板的功能。另有基因芯片结果提示在输卵管癌中显著扩增的基因包括Tspan9，提示Tspan9可能与输卵管肿瘤的发生有关。除此之外，尚未见Tspan9与肿瘤的其他相关研究报道。本课题组前期研究发现Tspan9在胃癌细胞中低表达，其在胃癌中的作用有待进一步明确。
目的：
研究四跨膜蛋白Tspan9对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响并探讨其作用机制，为胃癌的临床诊断及治疗提供理论基础和实验依据。
方法：
1.利用慢病转染胃癌SGC7901细胞建立Tspan9高表达组（Tspan9组）及空载体阴性对照组(NC组），不转染的为空白对照组(Blank组）；
2.应用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力，采用PI染色及流式细胞技术检测各组的细胞周期情况；
3.应用划痕实验以及Transwell小室模型分别测定以上各组细胞的迁移能力与侵袭能力；
4.用ELISA方法检测细胞培养上清中转移相关蛋白，如基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinaseplasminogenactivator，uPA)的分泌水平；
5.用Westernblot方法测定以上各组细胞的信号通路蛋白，如细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignal-regulatedkinases1and2，ERK1/2）与磷酸化的细胞细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）蛋白水平的变化，进行细胞信号通路探讨。
结果：
1.CCK8法检测结果显示Tspan9高表达组细胞增殖能力明显下降(P＜0.05)；
2.细胞周期测定显示Tspan9高表达组细胞多阻滞在G1期，S期细胞明显减少(P＜0.05)，提示细胞增殖能力降低的原因；
3.划痕实验提示Tspan9高表达组细胞运动能力下降，Transwell小室模型测定显示Tspan9高表达组细胞的迁移(P＜0.01)及侵袭能力(P＜0.01)均明显下降；
4.Westernblot及ELISA检测示：Tspan9高表达组细胞p-ERK1/2蛋白表达明显降低(P＜0.01)，提示ERK1/2通路受到抑制；转移相关蛋白MMP-9及uPA分泌降低(P＜0.01)，可能为细胞迁移及侵袭能力下降的原因。
结论：
四跨膜蛋白Tspan9抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移及侵袭功能，其机制可能与其抑制ERK1/2信号通路从而下调MMP-9及uPA的表达相关。因此，Tspan9可能是胃癌的潜在抑制因子。
四跨膜蛋白（tetraspanins）是指一组异质的四次跨膜蛋白超家族群，其能够招募其他细胞表面受体和信号蛋白到四跨膜蛋白富集微区（tetraspanin-enrichedmicrodomains，TEMs)，参与细胞内外的信号转导通路调控。四跨膜蛋白的表达常与肿瘤阶段、肿瘤类型及患者的预后相关，对肿瘤既可能起抑制作用也可能起促进作用。在肿瘤细胞株里进行四跨膜蛋白表达的干扰会对相应的不同类型的四跨膜蛋白富集微区的功能造成影响，进而调控肿瘤细胞的生长、侵袭和转移能力。Tspan9（Tetraspanin9，NET-5，PP1057)是四跨膜蛋白超家族（transmembrane4superfamily，TM4SF)的成员之一，现已有报道其能够通过与其他四跨膜蛋白及相关分子的结合来调节血小板的功能。另有基因芯片结果提示在输卵管癌中显著扩增的基因包括Tspan9，提示Tspan9可能与输卵管肿瘤的发生有关。除此之外，尚未见Tspan9与肿瘤的其他相关研究报道。本课题组前期研究发现Tspan9在胃癌细胞中低表达，其在胃癌中的作用有待进一步明确。
目的：
研究四跨膜蛋白Tspan9对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响并探讨其作用机制，为胃癌的临床诊断及治疗提供理论基础和实验依据。
方法：
1.利用慢病转染胃癌SGC7901细胞建立Tspan9高表达组（Tspan9组）及空载体阴性对照组(NC组），不转染的为空白对照组(Blank组）；
2.应用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力，采用PI染色及流式细胞技术检测各组的细胞周期情况；
3.应用划痕实验以及Transwell小室模型分别测定以上各组细胞的迁移能力与侵袭能力；
4.用ELISA方法检测细胞培养上清中转移相关蛋白，如基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9，MMP-9)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinaseplasminogenactivator，uPA)的分泌水平；
5.用Westernblot方法测定以上各组细胞的信号通路蛋白，如细胞外信号调节激酶1/2（extracellularsignal-regulatedkinases1and2，ERK1/2）与磷酸化的细胞细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）蛋白水平的变化，进行细胞信号通路探讨。
结果：
1.CCK8法检测结果显示Tspan9高表达组细胞增殖能力明显下降(P＜0.05)；
2.细胞周期测定显示Tspan9高表达组细胞多阻滞在G1期，S期细胞明显减少(P＜0.05)，提示细胞增殖能力降低的原因；
3.划痕实验提示Tspan9高表达组细胞运动能力下降，Transwell小室模型测定显示Tspan9高表达组细胞的迁移(P＜0.01)及侵袭能力(P＜0.01)均明显下降；
4.Westernblot及ELISA检测示：Tspan9高表达组细胞p-ERK1/2蛋白表达明显降低(P＜0.01)，提示ERK1/2通路受到抑制；转移相关蛋白MMP-9及uPA分泌降低(P＜0.01)，可能为细胞迁移及侵袭能力下降的原因。
结论：
四跨膜蛋白Tspan9抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移及侵袭功能，其机制可能与其抑制ERK1/2信号通路从而下调MMP-9及uPA的表达相关。因此，Tspan9可能是胃癌的潜在抑制因子。