去甲斑螯素对人白血病Jurkat细胞增殖及凋亡作用的影响

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bin52833093
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目的:观察去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对人急性T淋巴细胞白血病纽胞系Jurkat增殖及凋亡等生物学特性的影响;观察NCTD作用于Jurkat细胞系后,时间、剂量之间的关系;探寻NCTD对Jurkat细胞系增殖抑制作用及致凋亡的最佳作用时间及浓度;通过流式细胞分析法检测NCTD导致Jurkat细胞凋亡的作用,并就其致凋亡作用与经典化疗药物长春新碱相比较。进一步探讨NCTD对急性淋巴细胞白血病临床治疗价值的意义。  方法:常规方法培养人急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat,根据浓度不同分为五组:①正常对照组、②5mg/L组、③10mg/L组、④20mg/L组、⑤40mg/L组,分别在以下五个时间点:6h、12h、24h、48h、72h,通过倒置显微镜,观察细胞形态、密度改变的情况,检测去甲斑蝥素对Jurkat细胞的生长抑制作用;通过MTT法检测去甲斑蝥素作用于Jurkat细胞后的增殖抑制率;将实验分为四组:①正常对照组、②去甲斑蝥素组、③长春新碱组、④去甲斑蝥素+长春新碱组,通过Annexin V-PI流式细胞分析法(FCM)检测其对Jurkat细胞株的致凋亡作用。  结果:不同浓度的NCTD在不同时相对Jurkat细胞均有一定的抑制作用;当浓度为20mg/L的NCTD作用于Jurkat细胞72h后,细胞生长受抑明显,倒置显微镜下观察,可见细胞形态发生改变,细胞大小不等,形态不一,出现聚集、融合现象,散在、稀疏分布,可见细胞碎片,活细胞数目明显减少;MTT检测细胞增殖抑制率显示20mg/L组和40mg/L组相比无统计学意义(p>0.05),其余各组的增殖抑制率,与对照组相比,具有统计学意义(p<0.05)。相同浓度条件下,72h的增殖抑制率较48h高。不同浓度的NCTD在不同时相对Jurkat细胞均显示程度不同的增殖抑制效果,且具有时间-剂量依赖关系。流式细胞仪检测浓度为20mg/L的NCTD作用Jurkat细胞72h后,细胞早期凋亡率为46.19±2.58%。同时选10mg/L长春新碱以及去甲斑蝥素+长春新碱两种药物联合作用检测Jurkat细胞早期凋亡率。各组之间与对照组相比,均有统计学意义(p<0.05)。去甲斑蝥素组和长春新碱组对Jurkat细胞致凋亡的作用相差不明显,而去甲斑蝥素+长春新碱组致Jurkat细胞凋亡明显增强。  结论:不同浓度的NCTD在不同时相对Jurkat细胞的抑制作用也不同;当NCTD浓度为20mg/L,作用时间为72h时,Jurkat细胞生长明显受抑;相同浓度条件下,72h的增殖抑制率较48h高;不同浓度的NCTD在不同时相对Jurkat细胞均显示程度不同的增殖抑制作用,且具有时间-剂量依赖关系;NCTD致Jurkat细胞的早期凋亡的比率较长春新碱略低;去甲斑蝥素与长春新碱联合用药作用于Jurkat细胞可产生协同作用,早期凋亡率明显高于其单独用药。
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