三倍体丹参生长优势相关miRNAs的克隆及定量分析

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丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)是唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)的多年生草本植物,因为其根形似人参,根皮红如丹,故名丹参。中药丹参则为其干燥的根,是我国传统的中草药,广泛种植于我国多个省市。本实验室通过已有二倍体与四倍体的杂交获得三倍体丹参,经测量,培育出的三倍体丹参在性状以及药用成分含量等方面都展示出显著的优势。microRNA(miRNA)属于一类在转录后水平上调控基因表达的非编码小分子RNA,长度多数为21-25 nt。miRNA不仅在植物的生长发育,而且在环境条件的胁迫应答及其它生理反应中都起着重要的调节作用。目前miRNA的研究在生物学中逐渐地成为热点,对于miRNA在多倍体优势中的研究非常少,而针对丹参生长发育中的作用的研究更是少之又少。  鉴于上述原因,本文的研究主要集中于几个控制不同信号通路的miRNAs,采用分子克隆及序列比对的方法验证其表达,然后在不同倍性丹参的幼叶、老叶、花苞及根的进行表达差异分析,主要的结果有:  1通过提取丹参RNA,针对性地设计特异的茎环引物进行反转录,克隆测序之后确定了在丹参体内表达的5个miRNA的序列,分别为miR156、miR160、miR164、miR167和miR399。  2通过在植物小RNA网站上进行序列比对,和实时定量PCR分析鉴定了miR164和miR167与实验室已有的NAC1与ARF6序列相互配对,匹配度分别为8.701和18.85。  3在叶片的定量分析中,发现三倍体的miR156、miR167的表达相对低于二、四倍体,而miR160和miR164的相对表达量高于二、四倍体,分析上述miRNAs对于叶片生长大小有影响。  4在花苞的定量分析中,观察到三倍体中miR156及miR164的相对表达低于二、四倍体,这两个miRNAs的差异表达可能帮助三倍体花器官发育提前。5在根的定量分析中,三倍体中miR164表达低于二、四倍体,而miR167及miR399相对表达量高于其他两个倍体,对于根的生长有一定的促进作用。
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