一个血友病A家系的基因突变研究

• 作 者: 王典文
• 机 构: 广东医学院
• 出 处: 广东医学院
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 血友病A 因子Ⅷ活性 基因突变 细胞病理学

目的：⑴探讨长距离PCR、双管多重PCR和逆转录PCR在血友病A基因诊断中的应用。⑵探讨该血友病A家系FⅧ基因的突变类型与患者表型的关系，以及突变致病的分子机制。⑶观察该血友病A家系FⅧ基因的突变对该家系成员凝血功能及FⅧ活性的影响。　　
方法：①在CA1500型血液凝固分析仪上测定先证者及其家系成员凝血酶凝血功能、FⅧ∶C及FⅧ抗体滴度；②根据操作说明书从先证者及其家系成员外周血白细胞中提取基因组DNA和RNA；③长距离PCR和双管多重PCR技术检测该血友病家系FⅧ基因的内含子22和1倒位突变;4.逆转录PCR结合基因测序检测FⅧ的其它类型突变。　　
结果：⑴先证者及其胞弟、先证者外侄的APTT明显延长，FⅧ∶C中到重度降低。携带者仅表现FⅧ∶C在正常低值，受检的家系成员FⅧ抗体滴度均为零;⑵长距离PCR扩增和双管多重PCR扩增产物的电泳结果提示该家系不存在内含子22倒位和内含子1倒位;⑶逆转录PCR扩增产物的测序结果显示先证者及其胞弟、先证者外侄FⅧ基因存在2404C→T改变。　　
结论：①本实验采用的长距离PCR技术、双管多重PCR技术和逆转录PCR技术以及基因测序用于检测出HA的突变类型是可行的。②该HA家系的FⅧ基因14号外显子2404 C→T突变导致FⅧ发生Gln783X突变，推测此突变导致该家系患者FⅧ蛋白结构发生改变，进而降低FⅧ∶C，影响他们的凝血功能。③该HA家系的FⅧ基因14号外显子2404 C→T突变为国内首次报道，本研究结果丰富了人类FⅧ基因突变数据库的内容，可用于指导HA的遗传咨询和产前诊断，并为将来的基因治疗提供了帮助。