论文部分内容阅读
细菌感染、负荷过重、手术操作不当等是造成种植体周围炎的常见原因，其中细菌感染是导致种植修复失败的主要原因。细菌在种植体表面的黏附与定植是其发挥致病性的首要条件。在种植术后的临床修复过程中，我们会依据患者的口腔条件和要求，为其选择不同的修复材料进行种植体上部的冠修复。本试验选择四种临床常用合金制成试件，然后将其分别粘固在种植钛板上，观察四种龈下优势菌在其上黏附与定植的分布情况。
目的：将粘有四种合金(金铂合金、含钛镍铬合金、镍铬合金、金钯合金)的种植钛板试件，分别浸泡在含有一定细菌浓度的四种液体培养基中，每种液体培养基中所含细菌分别是牙龈卟啉单胞菌(Pg)；伴放线放线杆菌(Aa)；中间普氏菌(Pi)；具核梭杆菌(Fn)。在厌氧环境下培养，通过菌落形成单位计数法比较同一种细菌在不同金属表面附着量的变化；浸泡后培养液的PH值变化；扫描电镜观察细菌在两种材料表面上的附着分布情况。
方法：1试件的制作用电火花线切割机床将制造种植体的纯钛板切削成8.0×5.0×3.0mm试件，万能磨床磨光表面，表面粗糙度Ra=1.60μm，共64个。四种合金(A组含钛镍铬合金、B组镍铬合金、C组金铂合金、D组金钯合金)制成5.0×4.0×3.0mm试件各16个。有经验的技师对合金试件的一面进行磨平、抛光，达到临床要求的光滑度。所有合金试件最终厚度为0.3mm。试件抛光后用酒精棉球擦拭掉表面杂质，软皂液中浸泡，蒸馏水超声清洗，高温高压蒸汽消毒。无菌条件下将金属试件粘固于种植纯钛板的一端。各组试件置于垂直净化工作台中，紫外线照射24h后备用。2细菌的复苏，纯化将牙龈卟啉菌，中间普氏菌，伴放线放线杆菌，具核梭杆菌接种于预还原后的BHI(牛脑心)液体培养基中，37℃厌氧培养120h后，转种于预还原后的BHI(牛脑心)固体培养基中分纯，37℃厌氧培养120h，挑取单个菌落进行鉴定。3细菌悬液的制备：将纯化后的各菌接种于BHI血琼脂培养基中，37℃厌氧培养120h后，用BHI液体培养基洗脱各菌，配制成9×108CFU/ml菌液。4各组细菌对试件的粘附测定将处理好的合金试件组分别置于无菌的24孔板中，每孔一枚试件，每孔中再加入等量的BHI液体培养基和实验用的菌悬液，厌氧培养168h。5菌落计数取出培养后的各试件，放入无菌PBS液中，振荡洗涤试件1min，做倍比稀释。原液，10-1，10-2，10-3，10-4共5个浓度，分别取各浓度菌液200ml，均匀涂布于预还原后的BHI固体培养基中，37℃厌氧培养120h后进行菌落计数。6测定细菌培养的PH值将厌氧培养液离心后，取上清液用PHS-3C型酸度计测其PH值。7试件的扫描电镜观察每种细菌的每组试件取出一件，PBS冲洗3遍，30g/L戊二醛固定，乙腈梯度脱水，临界点干燥，喷金，扫描电镜观察各种菌在试件上的附着情况。
结果：1四种细菌在各试件上的附着量(1)Aa在A、B、C、D四组试件上的附着量分别为：5.16±1.121×105CFU/ml，2.95±0.8815×105CFU/ml，9.14±0.850×105CFU/ml，1.68±0.176×105CFU/ml.细菌附着量C组＞A组＞B组＞D组；(2)Pg在A、B、C、D四组试件上的附着量分别为：0.78±0.066，0.69±0.156，2.87±0.180，0.83±0.083.细菌附着量C组＞D组＞A组＞B组；(3)Pi在A、B、C、D四组试件上的附着量分别为：0.31±0.142，0.39±0.240，0.77±0.066，0.17±0.042.细菌附着量C组＞B组＞A组＞D组；(4)Fn在A、B、C、D四组试件上的附着量分别为：1.11±0.204，0.87±0.131，3.03±0.811，0.83±0.131.细菌附着量C组＞A组＞B组＞D组。2PH值的改变Aa黏附后的A、B、C、D四组培养液PH值测定结果为：7.92±0.223，7.86±0.155，8.08±0.138，7.71±0.174；Pg黏附后的A、B、C、D四组培养液PH值测定结果为：6.57±0.220，6.47±0.085，6.98±0.095，6.72±0.156；Pi黏附后的A、B、C、D四组培养液PH值测定结果为：7.43±0.219，7.48±0.124，7.55±0.114，7.48±0.086；Fn黏附后的A、B、C、D四组培养液PH值测定结果为：7.16±0.067，7.07±0.036，7.26±0.106，7.05±0.061.3统计学分析(1)Aa在各试件上的附着量B组与D组间无统计学差异，其余各组间均有统计学差异，其中A组与B组有统计学差异，P＜0.05，其余各组间有显著性差异，P＜0.01；(2)Pg在各试件上附着量，C组与其他各组间均有显著性差异，P＜0.01，A组，B组与D组间均无统计学差异，P＞0.05；(3)Pi在各组试件上附着量，C组与A组，D组有显著性差异P＜0.01，C组与B组有统计学差异P＜0.05，A组，B组与D组间均无统计学差异P＞0.05。(4)Fn在各试件上的附着量，C组与其余各组之间有显著性差异P＜0.01，A组，B组，D组间均无统计学差异P＞0.05.4扫描电镜观察结果Aa在各组试件上的附着情况：C组试件上可见大量的菌落，在金铂合金试件表面细菌的附着量多于种植钛板，A组与B组试件可见有一定量菌落附着，A组稍多于B组，但含钛镍铬合金、镍铬合金与种植钛板上细菌的附着量无明显区别。D组金钯合金试件上细菌附着明显少于其他各组，钛板上细菌的附着量也少于B组。Pg在各组试件上的附着情况：C组金铂合金试件上可有菌落聚集，生长成簇，附着的细菌数多于钛板，其余各组合金，包括钛板上只见有散在细菌黏附。三种合金与钛板上细菌附着的数量无明显差别。Pi在各组试件上的附着情况：C组金铂合金试件可见有散在细菌，数量较其所在的钛板上稍多，其余各组合金及钛板上可见散在细菌黏附，合金与钛板上附着的细菌数量无明显区别。Fn在各组试件上的附着情况：与Pg极为相似，只有金铂合金上细菌附着的数量稍多，偶有成簇，金钯合金表面细菌附着较少，且少于钛板，其他合金和钛板表面可见散在细菌黏附，细菌的附着量无明显区别。
结论：1不同合金材料对同种细菌的附着有影响。2钛与不同合金的组合对于同种细菌在钛板上的附着也有影响。3不同种类的细菌在同种合金上的附着量不同。