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第一章猪眼虹膜色素上皮细胞的培养和其生物学评价;目的:培养获得纯化的虹膜色素上皮(iris pigment epithelium,IPE)细胞,对体外培养IPE细胞的生物学特点进行观察,为以后的研究奠定基础.结论:通过酶辅助的显微分离方法,获得了IPE细胞高效纯化的培养;高效纯化细胞培养体系的实现和有关IPE细胞生物学特征的数据为以后的相关实验提供了稳定的细胞来源和资料.第二章腺相关病毒介导碱性成纤维细胞生长因子基因对IPE细胞的转染及表达;目的:研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体对IPE细胞的转染动力学和其细胞毒性,了解AAV载体转染IPE细胞合适的转染倍数(multiple of infection, MOI)、观察时间和转染效率,确定AAV载体在基因治疗中的可行性和安全性.结论:AAV病毒载体对体外培养IPE细胞的合适转染倍数在10<>~10<6>之间,其转染效率可达60﹪以上.腺相关病毒对IPE细胞生长无明显抑制作用,AAV作为视网膜色素变性基因治疗的载体是安全可行的.第二节腺相关病毒介导碱性成纤维细胞生长因子基因对IPE细胞的转染及表达;目的:观察AAV载体介导碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)基因对体外培养IPE细胞转染后,bFGF基因在细胞内转录和翻译水平的表达.结论AAV-bFGF转染IPE细胞后,IPE细胞在转录和翻译水平表达了bFGF基因,而且表达的基因产物具有生物活性.这为基因治疗视网膜色素变性提供了理论和技术支持.第三章视网膜色素变性小鼠的基因治疗及其机制;目的:应用AAV载体携带bFGF基因以先体外,后体内法(ex vivo)和体内法(in vivo)两种方式进行视网膜色素变性鼠(retinal degerneration slow,rds)的基因治疗,在分子生物学、形态学和功能学上进行基因治疗的初步观察.结论:AAV载体介导的bFGF基因可以在rds鼠视网膜下表达并通过抗凋亡的途径,改善了rds鼠感光细胞的变性,同时提高了得到挽救的感光细胞的功能.