【摘 要】
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本研究采用了比较成熟,应用较广的阳离子脂质体作为转基因方法.首先,为了能够使研究工作能够顺利的开展,本研究对金黄地鼠体外受精培养系统进行了初步研究.通过研究激素的注
【出 处】
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兰州医学院 兰州大学医学院 兰州大学
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本研究采用了比较成熟,应用较广的阳离子脂质体作为转基因方法.首先,为了能够使研究工作能够顺利的开展,本研究对金黄地鼠体外受精培养系统进行了初步研究.通过研究激素的注射剂量及时间间隔,得到40IU(PMSG、HCG)/只、72h这个优化组合,使得在以后的实验研究中,能够尽可能多的获取卵母细胞.本研究总结各实验室的经验,选择了几种常用而且稳定的培养基,研究在不同的培养体系中,卵母细胞的发育以及受精卵的分裂,二细胞胚胎的形成率,经过分析,本研究选择了受精卵发育良好,二细胞胚胎细胞形成率较高的TYH培养基,作为金黄地鼠体外受精的培养体系.其次,本研究在国内首次对运用脂质体将外源基因导入卵母细胞进行了研究,通过PCR扩增、Southern杂交、斑点杂交以及荧光原位杂交等分子生物学技术,检测外源基因在卵母细胞中的整合,以及这一方法的转基因效率.Southern杂交显示有69.23％的阳性率,荧光原位杂交进一步证实,外源基因已经在卵母细胞的染色体上整合,因此证实这一方法的可行性.同时也为进一步研究外源基因在金黄地鼠早期胚胎中的复制提供了依据.第三,制备转基因动物的目的,是产出具有导入基因的子代个体并且能够将导入基因稳定的传递给子代.脂质体可将外源基因导入卵母细胞染色体中,但基因能否通过细胞受精、卵裂后,随着个体发育进入子代个体细胞,本研究进一步采用荧光原位杂交技术对二细胞胚胎细胞进行了研究,并且最终证实了外源基因可以在二细胞胚胎细胞中进行复制.
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