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视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)于1894年由Devic首次描述,又称Devic病或Devic综合征,是一种累及视神经及脊髓的炎性脱髓鞘疾病,发病机制尚不明确。临床呈进行性或缓解与复发病程,曾一度被认为是MS的亚型,直至特异性抗体水通道蛋白4(AQP4)抗体,即NMO-Ig G的发现,2007年Wingerchuk提出视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)这一概念,并将NMO-Ig G阳性作为必要条件之一。随着后续研究的展开人们对NMOSD的认识逐渐丰满,2015年国际NMO诊断小组修定了新的诊断标准,并将NMO及NMOSD统一命名为NMOSD。干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)由活化的T细胞和NK细胞产生,又名巨噬细胞活化因子,是Ⅱ型干扰素的唯一成员,具有免疫调节的特性,可参与机体的炎症反应诱导免疫应答。人类IFN-γ基因位于染色体12q24.1,含有4个外显子和3个内含子,长约5.4kb。近年来一些研究表明IFN-γ可能与NMOSD的发病有关,参与NMOSD患者机体的免疫调节。IFN-γ第一内含子区SNP位点rs2430561(A/T)及第三内含子区SNP位点rs2234685(A/G)具有基因多态性,且rs2430561位点与IFN-γ的生成关系密切。研究表明rs2430561位点基因多态性与MS的发病不相关,rs2234685位点基因多态性与MS发病相关。但尚无相关研究报道上述两位点基因多态性是否与NMOSD易患性相关。因此,有必要从分子生物学角度对IFN-γrs2430561及rs2234685两位点基因多态性及其与NMOSD的相关性作以下讨论。目的:1从分子生物学角度研究NMOSD易患性与IFN-γ第一内含子区rs2430561和第三内含子区rs2234685两位点基因多态性的相关性,探讨其在NMOSD疾病中的作用。2研究NMOSD患者血清中IFN-γ水平的变化,探讨IFN-γ在NMOSD发病中的作用。3探讨NMOSD患者IFN-γ基因多态性与急性期IFN-γ水平、EDSS评分、急性期与缓解期EDSS分值差、体重指数、发病次数、病程等之间的关系,进一步探索其在NMOSD发病中的作用。4分析急性期IFN-γ水平与EDSS评分、初次发病年岁、体重指数、病程、发病次数之间的相关性。5分析EDSS评分及EDSS分值差与IFN-γ水平之间的相关性,分析EDSS评分与发病次数、初次发病年岁、病程、体重指数之间的相关性。6分析各基因型NMOSD患者相关临床资料(性别、AQP4阳性的分布、EDSS评分、初次发病年岁、发病次数、体重指数)有无差别。方法:1病例组:选择50例NMOSD患者,均符合2015年由Wingerchuk等人制定的NMOSD诊断标准,并详细记录病程、发病次数、EDSS评分、家族史、诱发因素、辅助检查(VEP、核磁共振成像、脑脊液及血清AQP4抗体)等临床资料。对照组:选择60例无血缘关系的健康人,年龄、性别均与病例组匹配,近期无感染、未应用免疫抑制剂;2抽取研究对象清晨空腹肘静脉血,并用EDTA抗凝,三天内用树脂型TM基因组DNA提取试剂盒(纯化树脂、GN结合液、漂洗液)按步骤提取基因组DNA;3采用基因测序的方法对IFN-γ基因SNP位点rs2430561、rs2234685进行检测;4从血液标本中分离血清,应用双抗体夹心酶联免疫(ELISA)方法测定血清中IFN-γ的水平;5对NMOSD患者分别进行EDSS评分、初次发病年岁、病程、发病次数、体重指数等临床资料收集;6应用SPSS 21.0统计软件进行分析。病例组和对照组基因型的分布经哈迪-温伯格平衡检验,证明有群体代表性。IFN-γ基因型、等位基因数、性别用直接计数法计数,计算各等位基因及基因型频率,组间比较用X2检验。IFN-γ水平、EDSS评分、年龄、病程、发病次数以及体重指数以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较用t检验,多组间比较用单因素方差分析或非参数检验。采用双变量相关与回归分析检验EDSS评分与IFN-γ急性期和缓解期水平、年龄、病程、发病次数、体重指数间的相关性。显著检验水准为P<0.05。结果:1各组间血清IFN-γ水平比较急性期NMOSD组IFN-γ水平(14.9892±5.1227)pg/ml与健康对照组(8.1623±7.8878)pg/ml比较差异有统计学意义(P<0.05);急性期NM OSD组IFN-γ水平(14.9892±5.1227)pg/ml与缓解期NMOSD组(7.4697±5.6612)pg/ml比较差异有统计学意义(P<0.05);缓解期NMOSD组IFN-γ水平(7.4697±5.6612)pg/ml与健康对照组(8.1623±7.8878)pg/ml比较差异无统计学意义(P>0.05)。2各组基因型分布的哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)平衡检验1)IFN-γsnp位点rs2234685未检测到突变基因型,110例均为AA纯合子。2)NMOSD组及健康对照组IFN-γsnp位点rs2430561基因型频率经检验,符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。3各组间基因型分布和等位基因频率的比较1)IFN-γsnp位点rs2234685未检测到突变基因型,110例均为AA纯合子。2)IFN-γrs2234685位点基因型分布:NMOSD组与健康对照组比较无显著差异(P>0.05);该位点A及T等位基因频率:NMOSD组与健康对照组比较无显著差异(P>0.05)。4 IFN-γ各基因型与NMOSD组临床资料间的关系IFN-γ各基因型与NMOSD组EDSS评分组间比较,TT与AT差异有统计学意义(P<0.05),TT与AA、AT与AA比较差异均无统计学意义(P>0.05);IFN-γ各基因型组与NMOSD组急性期与缓解期EDSS分值差、AQP4阳性率、性别、初次发病年岁、病程、发病次数、体重指数BMI进行组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。5 NMOSD组急性期与缓解期EDSS评分间的关系NMOSD组急性期EDSS评分(4.24±2.32)与缓解期EDSS评分(3.21±1.96)间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。6临床统计资料的相关性及回归性比较EDSS评分与病程、初次发病年岁、发病次数、体重指数呈正相关(P<0.05)。7病毒感染、妊娠等可能为NMOSD的诱因。结论:1 50例NMOSD患者IFN-γ第三内含子区snp位点rs2234685均为AA纯合子基因型,IFN-γrs2234685位点可能与NMOSD易感性不相关。2 IFN-γ第一内含子区snp位点rs2430561可能与NMOSD易感性不相关。3 NMOSD组急性期IFN-γ水平急剧升高,随着病情好转至缓解期IFN-γ水平恢复至正常水平,表明在NMOSD的发病过程中IFN-γ起促进作用。4 IFN-γ基因多态性与急性期IFN-γ水平、EDSS评分、急性期与缓解期EDSS分值差、AQP4阳性率、性别、初次发病年岁、体重指数、病程、发病次数等均无显著相关性。5 IFN-γ水平与EDSS评分无显著相关性;急性期IFN-γ水平与初次发病年岁、体重指数、病程、发病次数均无显著相关性。6 EDSS评分与病程、体重指数、初次发病年岁及发病次数呈正相关。7病毒感染、妊娠等可能为NMOSD的诱因。