有机磷农药中毒快速诊断试纸条研制

• 作 者: 杨明明
• 出 处: 南京农业大学
• 发表日期: 2004年期
• 关键词: 有机磷中毒 BChE单克隆抗体 酶抑制法 纳米材料 免疫层析试纸条

本文利用酶抑制原理结合免疫检测方法建立了一套能够同时检测人体内BChE酶活性和酶总量的夹心免疫层析试纸条(ICTS)体系,分别利用夹心免疫(sandwich immunoassay)和Ellman检测法同时测出样品中丁酰胆碱(BChE)的总量和仍保留活性的BChE量,将两者相减则可得知人体内BChE的受抑制程度。在夹心型免疫检测中,检测线T(Test Line)包被BChE单克隆抗体(anti-BChE),质控线C(Control Line)包被羊抗鼠IgG,金标anti-BChE包被在金标垫上。其中,anti-BChE作为捕获抗体,对磷酰化BChE(OP-BChE,以paraoxon-BChE为代表)和非磷化BChE,这样就能够将样品中的BChE/OP-BChE准确而快速地捕捉出来;另外,胶体金(AuNPs)标记的anti-BChE可以作为检测抗体,通过测定AuNPs颜色信号以确定人体内磷化BChE和非磷化BChE的总量。之后,将检测线T剪下,用Ellman检测法对仍有活性的BChE进行检测。然后,用总的BChE量减去非磷化的BChE量即可得出人体中BChE的受抑制程度。通过对一系列因素包括金标anti-BChE的使用量,试纸条层析液,免疫反应时间等条件的优化,得到该方法对酶总量和酶活性的检测线性范围分别为1.0-18.75 nM和1.0-37.5 nM,两者的最低检测限均为0.5 nM,低于体内BChE总量(约50-80 nM)的2%。同时,我们通过将ICTS检测结果与经典的Ellman检测法进行相关性比较,得出相对偏差在10%以内;并将该体系成功应用于人体血样测定,血样检测结果与所提供的LC-MS检测结果相比,误差在10%之内的占总样本的70.4%。总之,该方法结合了试纸条的便携、快速与BChE单克隆抗体可同时作为捕获抗体和检测抗体的特性,提供了一种不需要酶基线,低消耗,就可以实现对人体实际血样进行有机磷农药中毒的检测方法。