【摘 要】
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猪瘟是严重危害养猪业的重要传染病之一,猪瘟病毒(classical swinefever virus,CSFV)是猪瘟的病原体,属黄病毒科(flaviviridae),瘟病毒属(pestivirus).鉴于病 毒蛋白在病毒感
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猪瘟是严重危害养猪业的重要传染病之一,猪瘟病毒(classical swinefever virus,CSFV)是猪瘟的病原体,属黄病毒科(flaviviridae),瘟病毒属(pestivirus).鉴于病 毒蛋白在病毒感染,诱导机体免疫以及病毒细胞相互关系中的重要作用,本研究分别 克隆了猪瘟病毒中国强毒石门毒株和/或兔化弱毒疫苗株的E0,E2,NS3丝氨酸蛋白酶功能区(即 NS3(ΔC))及衣壳蛋白C等六个基因或功能基因片段,进行了序列测定与分 析;构建了能在Sf9细胞中表达GST-EO,GST-E2和GST-GFP-E2 融合蛋白的重组杆状病 毒,并在体外进行了表达.分别构建了真核表达载体pEGFP-E0(或NS3(ΔC)),以绿色 荧光蛋白GFP为标志蛋白,瞬时表达结果表明E0和NS3(ΔC)蛋白均主要位于细胞的胞浆内;将NS3(ΔC)基因亚克隆至pET-28a中,并在E.coli中获得高效表达,将表达产物纯化并免疫小鼠,间接免疫荧光和westernblot结果表明制备了针对NS3(ΔC)蛋白的多克隆抗体.将石门株衣壳蛋白基因亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,并成功地在E.coli中获得了高效表达.将石门毒E2基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建表达CSFV E2蛋白的重组质粒pcE2,用脂质体转染法将pcE2导入cos-7细胞进行瞬时表达,用针对E2蛋白的特异性单抗以间接免疫荧光法检测,结果E2蛋白在cos-7细胞中成功表达,随之将pcE2质粒DNA进行小鼠肌内接种免疫,ELISA和病毒中和试验表明DNA免疫后小鼠体内可诱导机体产生CSFV中和抗体;上述结果为研制针以CSFV的DNA疫苗、亚单位疫苗及其论断诊断试剂打下了基础.与此同时对影响CSFV感染的某些环节进行了探索.最 后作者探讨了寡聚核苷酸对CSFV复制的影响以及作为抗
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