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研究背景及目的
肺癌(LC)是全球发病率和死亡率最高的癌症，包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。非小细胞肺癌约占所有肺癌的85%，其5年生存率不足15%。目前针对NSCLC的治疗主要包括手术、基于铂类的化疗、放疗及靶向治疗等，尤其是基于肺癌相关驱动基因研发的受体酪氨酸激酶抑制剂(TKls)对晚期NSCLC患者疗效显著。然而，随着治疗的进行，各种靶向药物都不可避免地出现耐药性，因此寻找新的靶向治疗位点和治疗方案成为肺癌研究的热点。部分研究发现，Brutons酪氨酸激酶(BTK)在实体肿瘤中的表达与肿瘤细胞存活有关；抑制BTK的表达能选择性衰减肿瘤细胞的生长，但不影响正常细胞生长；表明BTK可能作为实体肿瘤的靶向治疗位点。目前有关BTK与NSCLC的关系尚无相关研究，BTK在NSCLC中的作用及其分子机制仍不清楚。近来，以程序性死亡分子-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)为靶轴的免疫检查点抑制剂己成为晚期NSCLC患者二线治疗的新标准；通过免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织中PD-L1的表达已作为预测免疫检查点抑制剂反应的生物标记物应用于临床实践中。经FDA批准用于IHC检测的PD-L1抗体有4个克隆号，由于不同克隆号阳性表达成分不同且缺乏统一的评分标准，使得PD-L1在NSCLC中的表达及其意义存在较大差异。本研究采用IHC检测BTK、PD-L1在NSCLC中的表达情况，初步探讨其与临床病理参数、肺癌相关驱动基因的关系。
材料和方法
收集广州医科大学附属第一医院2018年4月～2019年1月经组织学确诊为NSCLC的手术切除标本共971例。采用IHC分别检测BTK、PD-L1在NSCLC中的表达。应用二代测序技术、扩增阻滞突变系统-PCR(ARMS-PCR)法检测肺癌相关驱动基因(EGFR、KRAS、ALK、ROS1、RET、ERBB2、PIK3CA、NRAS、BRAF)的突变情况。使用SPSS分析BTK、PD-LI在NSCLC中的表达及其与临床病理参数、肺癌相关驱动基因的关系。
结果
1.NSCLC肿瘤细胞和间质淋巴细胞均表达BTK。BTK在肿瘤细胞的表达率为11.95%(116/971)，其中高表达29例、低表达87例；在间质淋巴细胞的表达率为99.18%(963/971)，其中淋巴细胞BTK＞50%阳性者占61.89%(601/971)。
2.BTK在鳞状细胞癌(SCC)肿瘤细胞的表达水平高于腺癌(AD)(19.70%VS10.78%，P=0.028＜0.05);其在AD的表达与肿瘤大小、胸膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05)，而在SCC中的表达则与上述临床病理参数均无关(P＞0.05)。
3.BTK在AD中的表达与ALK、ROS1基因融合有关(P＜0.05)，与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系（P＜0.05，r分别为0.078、0.104）；BTK在ALK融合蛋白(+)中的表达明显高于ALK融合蛋白（-）(25.81%VS11.49%，P=0.033＜0.05)。
4.当肿瘤细胞PD-L1取1%、5%及50%阳性截断值时，PD-L1在SCC中的表达水平明显高于AD(80.00%VS23.71%、80.00%VS22.68%、44.00%VS8.25%，均P＜0.001)；在AD的表达与年龄、吸烟、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及组织学亚型有关（P＜0.05），而在SCC的表达则与上述临床病理参数均无关(P＞0.05)。
5.当肿瘤细胞PD-L1取1%和5%阳性截断值时，PD-L1在AD中的表达与EGFR基因突变有关(P＜0.05)；取50%阳性截断值时，与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系（P分别为0.041、0.019，r分别为0.113、0.137）。
结论
1.BTK可表达于NSCLC组织，但不表达于癌旁正常肺组织；提示BTK可能作为NSCLC的靶向治疗位点。
2.BTK在AD中的表达与肿瘤大小、胸膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期等临床预后因素有关，而在SCC中的表达则与上述预后因素均无关；提示BTK可能与AD的关系更为密切。
3.AD中BTK表达与ALK融合基因及蛋白的表达有关；推测BTK在AD中可能参与ALK介导的信号通路发挥作用。
4.PD-L1在SCC中的表达水平高于AD;AD中其表达与吸烟、肿瘤大小及淋巴结转移等临床病理参数有关，而SCC中均无关；提示PD-L1在AD和SCC中可能有不同的作用机制。
5.当肿瘤细胞PD-L1取50%阳性截断值时，其在AD中的表达与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系；提示AD中PD-L1高表达可能与ALK蛋白融合有关。
肺癌(LC)是全球发病率和死亡率最高的癌症，包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。非小细胞肺癌约占所有肺癌的85%，其5年生存率不足15%。目前针对NSCLC的治疗主要包括手术、基于铂类的化疗、放疗及靶向治疗等，尤其是基于肺癌相关驱动基因研发的受体酪氨酸激酶抑制剂(TKls)对晚期NSCLC患者疗效显著。然而，随着治疗的进行，各种靶向药物都不可避免地出现耐药性，因此寻找新的靶向治疗位点和治疗方案成为肺癌研究的热点。部分研究发现，Brutons酪氨酸激酶(BTK)在实体肿瘤中的表达与肿瘤细胞存活有关；抑制BTK的表达能选择性衰减肿瘤细胞的生长，但不影响正常细胞生长；表明BTK可能作为实体肿瘤的靶向治疗位点。目前有关BTK与NSCLC的关系尚无相关研究，BTK在NSCLC中的作用及其分子机制仍不清楚。近来，以程序性死亡分子-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)为靶轴的免疫检查点抑制剂己成为晚期NSCLC患者二线治疗的新标准；通过免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织中PD-L1的表达已作为预测免疫检查点抑制剂反应的生物标记物应用于临床实践中。经FDA批准用于IHC检测的PD-L1抗体有4个克隆号，由于不同克隆号阳性表达成分不同且缺乏统一的评分标准，使得PD-L1在NSCLC中的表达及其意义存在较大差异。本研究采用IHC检测BTK、PD-L1在NSCLC中的表达情况，初步探讨其与临床病理参数、肺癌相关驱动基因的关系。
材料和方法
收集广州医科大学附属第一医院2018年4月～2019年1月经组织学确诊为NSCLC的手术切除标本共971例。采用IHC分别检测BTK、PD-L1在NSCLC中的表达。应用二代测序技术、扩增阻滞突变系统-PCR(ARMS-PCR)法检测肺癌相关驱动基因(EGFR、KRAS、ALK、ROS1、RET、ERBB2、PIK3CA、NRAS、BRAF)的突变情况。使用SPSS分析BTK、PD-LI在NSCLC中的表达及其与临床病理参数、肺癌相关驱动基因的关系。
结果
1.NSCLC肿瘤细胞和间质淋巴细胞均表达BTK。BTK在肿瘤细胞的表达率为11.95%(116/971)，其中高表达29例、低表达87例；在间质淋巴细胞的表达率为99.18%(963/971)，其中淋巴细胞BTK＞50%阳性者占61.89%(601/971)。
2.BTK在鳞状细胞癌(SCC)肿瘤细胞的表达水平高于腺癌(AD)(19.70%VS10.78%，P=0.028＜0.05);其在AD的表达与肿瘤大小、胸膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期有关(P＜0.05)，而在SCC中的表达则与上述临床病理参数均无关(P＞0.05)。
3.BTK在AD中的表达与ALK、ROS1基因融合有关(P＜0.05)，与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系（P＜0.05，r分别为0.078、0.104）；BTK在ALK融合蛋白(+)中的表达明显高于ALK融合蛋白（-）(25.81%VS11.49%，P=0.033＜0.05)。
4.当肿瘤细胞PD-L1取1%、5%及50%阳性截断值时，PD-L1在SCC中的表达水平明显高于AD(80.00%VS23.71%、80.00%VS22.68%、44.00%VS8.25%，均P＜0.001)；在AD的表达与年龄、吸烟、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期及组织学亚型有关（P＜0.05），而在SCC的表达则与上述临床病理参数均无关(P＞0.05)。
5.当肿瘤细胞PD-L1取1%和5%阳性截断值时，PD-L1在AD中的表达与EGFR基因突变有关(P＜0.05)；取50%阳性截断值时，与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系（P分别为0.041、0.019，r分别为0.113、0.137）。
结论
1.BTK可表达于NSCLC组织，但不表达于癌旁正常肺组织；提示BTK可能作为NSCLC的靶向治疗位点。
2.BTK在AD中的表达与肿瘤大小、胸膜侵犯、淋巴结转移及TNM分期等临床预后因素有关，而在SCC中的表达则与上述预后因素均无关；提示BTK可能与AD的关系更为密切。
3.AD中BTK表达与ALK融合基因及蛋白的表达有关；推测BTK在AD中可能参与ALK介导的信号通路发挥作用。
4.PD-L1在SCC中的表达水平高于AD;AD中其表达与吸烟、肿瘤大小及淋巴结转移等临床病理参数有关，而SCC中均无关；提示PD-L1在AD和SCC中可能有不同的作用机制。
5.当肿瘤细胞PD-L1取50%阳性截断值时，其在AD中的表达与ALK融合蛋白表达之间呈正相关关系；提示AD中PD-L1高表达可能与ALK蛋白融合有关。