论文部分内容阅读
目的:
通过对一个遗传性多发性骨软骨瘤家系的基因突变进行检测和分析,确定这个遗传性多发性骨软骨瘤家系的致病基因,建立遗传性多发性骨软骨瘤病的基因诊断实验室方法,为患者生育后代提供遗传咨询和产前诊断,从而降低HME的发病率；同时也为进一步研究该病的分子机制和基因治疗该病提供依据。
方法：
收集一个遗传性多发性骨软骨瘤大家系,另随机选取与该家系均无关的健康个体30例作为对照。由于80％以上的HME患者是由EXT1和EXT2基因突变导致,本实验首先选取与候选基因EXT1、EXT2紧密连锁、多态性好、杂合率高的短串联重复序列(short tandem repeat,STR):D8S522、D8S1694、D11S1355、D11S986、D11S903,对家系内18名采血成员的4个STR位点行PCR-非变性聚丙烯凝胶电泳分型后,根据家系成员关系构建单体型进行连锁分析,确定候选基因。然后分段扩增覆盖候选基因编码区及剪切位点的序列,再进行单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)筛查,最后测序。
结果：
连锁分析结果将该家系的致病基因确定为EXT2；SSCP筛查候选基因EXT2所有片段均未出现多态性；对先证者EXT2基因所有扩增片段测序发现EXT2基因536G>A无义突变,其它位点未发现突变。该突变位于EXT2基因第三外显子,导致编码第180位氨基酸的密码子改变为终止密码子。在这个家系中,该突变与疾病共分离,且对照组均不存在此突变；另外发现家系成员Ⅱ7连锁分析与患者具有相同的单体型、测序与患者具有相同的突变,但未发病。
结论：
本研究发现的EXT2基因536G>A无义突变是导致该家系HME的致病突变；Ⅱ7为外显不全。