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目的:
研究小鼠单纯疱疹性角膜基质炎(HSK)发生和发展过程中白细胞介素-9(interleukin-9,IL-9)在角膜组织中的表达水平,分析IL-9与HSK的关系,为进一步研究IL-9在HSK疾病过程发挥的作用奠定基础。
方法:
实验组用单纯疱疹病毒1型(HSV-1)接种于BALB/c小鼠角膜上建立HSK动物模型,对照组采用DMEM液接种。显微镜下在各时间点(第1、3、5、7、8、10、14、21d),观察小鼠的角膜混浊程度。分别于角膜接种前及接种后第1、3、5、7、8、10、14、21d收集小鼠角膜。组织学检查角膜的病理改变,实时荧光定量(Real-time)PCR的方法检测小鼠角膜中IL-9tuRNA的表达,制作小鼠角膜冰冻切片后使用免疫荧光技术检测角膜中IL-9蛋白的表达。采用配对t检验,Kruskal-Wills检验,Nemenyi法检验进行统计学分析,以P＜0.05作为差异有统计学意义。
结果:
1、实验组角膜接种病毒后第1d开始小鼠出现不同程度的角膜上皮层损害,于病毒接种后第7d角膜上皮损害基本痊愈,开始出现角膜基质混浊,角膜基质混浊逐渐加重,于接种后第14d时达到高峰,而后至21d角膜基质混浊程度逐渐减轻。接种后第14d,组织病理学显示角膜基质层高度水肿、增厚,角膜基质内大量炎性细胞浸润,新生血管增生。对照组小鼠角膜未见明显病理性改变。实验组接种后7、8、10、14、21d平均角膜基质混浊评分与对照组相比有统计学差异(P＜0.05)。
2、Real-timePCR数据显示:接种HSV-1后1d小鼠角膜中IL-9mRNA明显增加(6.37±0.45),约为接种前小鼠角膜的6.37倍,高表达持续至HSV-1接种后14d,接种HSV-1后3d小鼠角膜中IL-9mRNA表达量约为接种前小鼠角膜的5.66倍,接种HSV-1后5d小鼠角膜中IL-9mRNA表达量约为接种前小鼠角膜的3.93倍,接种HSV-1后7d小鼠角膜中IL-9mRNA表达量约为接种前小鼠角膜的3.62倍,接种HSV-1后8-d小鼠角膜中IL-9mRNA表达量约为接种前小鼠角膜的3.23倍,接种HSV-1后10d小鼠角膜中IL-9mRNA表达量约为接种前小鼠角膜的2.57倍,接种HSV-1后14d小鼠角膜中IL-9mRNA.表达量约为接种前小鼠角膜的2.19倍,接种HSV-1后21d小鼠角膜中IL-9rnRNA、基本恢复至接种前水平(1.23±0.09),约为接种前小鼠角膜的1.23倍。接种HSV-1后1、3、5、7、8、10、14d角膜中IL-9mRNA相对表达量与接种前相比有统计学差异(P＜0.05),接种后21d角膜中IL-9mRNA相对表达量与接种前相比无统计学差异(P＞0.05)。
3、免疫荧光技术:接种HSV-1后小鼠角膜中可见IL-9蛋白的表达。IL-9蛋白表达于接种后小鼠角膜的上皮层、基质层及内皮层,尤其是基质层炎性细胞上。而接种前小鼠角膜组织中未见IL-9蛋白阳性表达。
结论:
HSV-1上调了IL-9在HSK小鼠角膜组织中的表达,IL-9表达于HSK小鼠角膜上皮层、基质层及内皮层中,IL-9参与了HSK的发生和发展过程。