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R-Spondin家族蛋白（RSpos）是一类在脊椎动物胚胎及个体中普遍存在的分泌型糖蛋白。RSpo蛋白最主要的功能是作为Wnt/β-caternin经典信号通路的激活物，参与调控一些依赖于该信号通路的下游基因表达。
在某些由Wnt通路受阻引起的癌症中，R-Spondin作为经典Wnt信号途经的激活剂，有望成为有效的治疗成分，可作为针对癌症的基因治疗候选药物。
本研究以腺相关病毒载体系统AAV Helper-free系统为基础，拟构建携带R-Spondin家族三个基因（R-Spondin1、RPE-Spondin、R-Spondin3）的重组腺相关病毒载体，包装出含有目标基因的重组腺相关病毒，并通过病毒介导目标基因在宿主细胞里进行表达。
通过PCR方法，将绿色荧光蛋白（EGFP）、myc抗原、6×His多标签标记的R-Spondin融合基因扩增出来，将融合基因扩增产物插入到AAV表达质粒pAAV-MCS多克隆位点中，构建出重组腺相关病毒载体。重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒。重组病毒感染AAV-HT1080细胞，荧光显微镜以及Western blot检测病毒介导的目标基因表达，流式细胞技术测定病毒滴度。
重组病毒载体pAAV-RSpol-EGFP、pAAV-RPESpo-EGFP、pAAV-RSpo3一EGFP构建成功，并成功包装出具有侵染性的重组腺相关病毒rAAV-RSpo1-EGFP、rAAV-RPESpo-EGFP、rAAV-RSpo3-EGFP。病毒感染的细胞中检测到绿色荧光，Western检测到目标蛋白条带，表明重组病毒包装成功并介导融合基因在宿主细胞里表达，病毒滴度达4×106 VP/mL，为今后利用腺相关病毒载体进行R-Spondin相关的体内体外研究并开发成抗肿瘤的基因治疗药物提供了实验基础。