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本文主要从以下几方面进行论述: 第一部分 益气补肾法治疗糖尿病脑病的有效性评价 目的: 运用meta分析系统评价益气补肾法治疗糖尿病脑病的有效性。 方法: 应用计算机检索中国知网、万方医学网、Cochrane Library、Embase、PubMed等数据库中运用益气补肾法治疗糖尿病脑病的随机对照临床试验文献,检索时间从建库到2017年12月31日,严格按照纳入标准筛选合格研究,应用stata12.0软件分析统计益气补肾法治疗糖尿病脑病的有效性,获得相对可靠的临床证据。 结果: 共有10个随机对照试验纳入研究,共718例患者,meta分析结果显示:应用益气补肾法与其他应用西药等治疗糖尿病脑病相比疗效显著[OR=4.61,95%CI(2.93,7.25),z=6.62,P<0.01],不良反应描述较少,本次研究未统计,纳入文献无发表偏倚(P>0.05)。 结论: 益气补肾法治疗糖尿病脑病疗效显著,值得临床推广,目前研究质量偏低,总体研究例数较少,仍需大数据、多中心的随机双盲临床研究的进一步补充。 第二部分 益气补肾中药对脑缺血再灌注糖尿病大鼠的干预研究 目的: 通过脑缺血再灌注糖尿病大鼠动物模型,探求涉及炎症、晚期糖基化终末产物、氧化应激途径的TIPE2-AGEs-UCP2轴的水平变化,并探讨益气补肾中药对动物模型的干预作用,以求更好地反馈临床并指导临床实践中治疗糖尿病脑病。 方法: 选8周龄Wistar雄性大鼠100只,体重250±5g。随机分为正常组(双蒸水,3ml/d,n=25)、实验组(n=75),实验组将先后通过腹腔注射STZ、改良Zea-Longa法诱导的脑缺血再灌注糖尿病大鼠分为模型组(双蒸水,3ml/d,n=25)、低剂量灌胃组(益气补肾中药,200mg/kg,3ml/d,n=25)、高剂量灌胃组(益气补肾中药,800mg/kg,3ml/d,n=25),模拟药物的治疗作用,于灌胃8周后,对动物进行水迷宫测试,之后处死大鼠取脑通过HE染色、尼氏染色检测海马区域神经元形态,免疫组化法检测TIPE2-AGEs-UCP2轴蛋白表达水平,RT-PCR法检测TIPE2-AGEs-UCP2轴mRNA表达水平。 结果: 1.血糖结果:与正常组相比较,模型组与各中药灌胃组大鼠实验前后血糖均高于正常水平(>16.7mmol/L);低、高剂量灌胃组与模型组相比实验前后血糖降低明显(P<0.05或P<0.01);低、高剂量灌胃组相比较实验前后血糖水平及血糖变化均不明显(P>0.05)。 2.体重结果:与正常组相比较,模型组与各中药灌胃组大鼠均表现体重较轻(P<0.01);低、高剂量灌胃组大鼠体重较模型组重(P<0.01);低、高剂量灌胃组之间无明显差异(P>0.05)。 3.定位航行试验结果:与正常组相比较,模型组与各中药灌胃组大鼠平均潜伏期均明显延长(P<0.05或P<0.01);低、高剂量灌胃组大鼠潜伏期较模型组短(P<0.05);低、高剂量灌胃组之间无明显差异(P>0.05)。 4.空间探索试验结果:与正常组相比较,模型组与各中药灌胃组大鼠穿越平台次数均明显较少(P<0.05或P<0.01);低、高剂量灌胃组大鼠穿越平台次数较模型组多(P<0.05或P<0.01);低、高剂量灌胃组之间无明显差异(P>0.05)。 5.动物脑组织HE染色结果:正常组神经元细胞无明显损伤、排列整齐有序、形态清晰、结构完整;模型组神经元细胞损伤严重、排列紊乱、形态模糊、结构不完整;低、高剂量灌胃组神经元细胞损伤较轻、排列较整齐、形态较清晰、结构较完整。 6.动物脑组织尼氏染色结果:正常组神经元无明显损伤、锥体细胞整齐有序、形态清晰、结构完整、胞浆内尼氏小体丰富;模型组神经元损伤严重,锥体细胞排列紊乱、形态模糊、结构不完整、尼氏小体明显减少;低、高剂量灌胃组神经元细胞排列较整齐、形态较清晰、结构较完整、尼氏小体较丰富。 7.动物脑组织免疫组化染色结果:UCP2主要分布于大鼠神经元细胞的胞浆中,TIPE2、AGEs主要分布于大鼠神经元细胞的胞浆和胞核中,均呈棕黄色颗粒;正常组TIPE2、AGEs、UCP2、TIPE2-AGEs-UCP2轴蛋白表达水平较低,散在少许棕黄色颗粒,与正常组相比较,模型组与各中药灌胃组TIPE2、AGEs、UCP2、TIPE2-AGEs-UCP2轴蛋白表达水平均明显高(P<0.05或P<0.01),散在较多棕黄色颗粒;与模型组相比较,低、高剂量灌胃组TIPE2、AGEs、UCP2、TIPE2-AGEs-UCP2轴蛋白表达水平较低(P<0.05或P<0.01),棕黄色颗粒较少;低、高剂量灌胃组之间无明显差异(P>0.05)。 8.RT-PCR结果:与正常组相比,模型组与各中药灌胃组TIPE2、AGEs、UCP2、TIPE2-AGEs-UCP2轴mRNA表达水平均明显高(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,低、高剂量灌胃组TIPE2、AGEs、UCP2、TIPE2-AGEs-UCP2轴mRNA表达水平较低(P<0.05);低、高剂量灌胃组之间无明显差异(P>0.05)。 结论: 1.通过腹腔注射STZ、改良Zea-Longa法诱导的脑缺血再灌注糖尿病大鼠模型,血糖明显升高,体重明显下降,益气补肾中药可明显改善动物模型血糖、体重水平。 2.脑缺血再灌注糖尿病大鼠学习记忆能力明显减弱,益气补肾中药可以明显改善动物模型的学习记忆能力。 3.脑缺血再灌注糖尿病大鼠神经元细胞及内部结构破损严重,益气补肾中药可以明显改善动物模型神经元细胞及内部结构破损情况。 4.脑缺血再灌注糖尿病大鼠TIPE2-AGEs-UCP2轴蛋白、mRNA水平均明显升高,这提示TIPE2-AGEs-UCP2轴可能参与了糖尿病脑病的发病过程。 5.益气补肾中药可以降低TIPE2-AGEs-UCP2轴水平,对糖尿病神经组织有保护作用,可以用于糖尿病脑病的治疗。