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目的:许多肿瘤化疗药物主要通过诱导肿瘤细胞凋亡发挥作用，当肿瘤细胞对凋亡产生耐药时，其放疗或化疗效果就会降低。诱导自噬可提供一个替代的治疗方法，自噬过多也会引起自噬性细胞死亡。藤黄属植物中所含的叶酮类和苯甲酮类化合物具有显著的抗肿瘤活性，其具有多种抗肿瘤机制。发现云南藤黄中分离出来的天然小分子化合物Guttiferone K(GUTK)可调节HeLa细胞的自噬作用。本研究将探讨GUTK通过调控自噬信号在营养缺失条件下诱导肿瘤细胞死亡的机制。 方法: 1、利用稳定转染GFP-LC3的HeLa细胞株，从藤黄属植物化合物库中筛选调节自噬的化合物，然后利用western blot检测LC3Ⅱ和SQSTM1/p62的表达水平。 2、在营养缺乏的环境下，利用流式细胞仪PI染色法检测Sub-G1，并用westernblot检测凋亡相关和自噬相关蛋白的变化。 3、自噬抑制剂HCQ抑制GUTK在饥饿时诱导的细胞死亡，用western blot方法检测相关蛋白变化。 4、用DCFH-DA染色，在荧光显微镜下拍摄，观察GUTK在营养缺乏时对HeLa细胞ROS的影响。 5、GUTK在营养缺乏时可通过Akt/mTOR通路调节自噬，用Western Blot方法检测Akt和mTOR的变化。 结果: 1、在HeLa细胞中，GUTK可诱导GFP-LC3 puncta的增加;同时GUTK可以浓度及时间依赖的增加LC3Ⅱ条带含量，显著降低P62蛋白含量。这一结果提示GUTK可能是自噬信号诱导剂，促进了p62蛋白的降解过程。 2、GUTK5μM在饥饿情况下作用HeLa细胞6小时后，细胞变圆，且能够显著增加PI的颜色，说明GUTK在饥饿情况下能够诱导细胞死亡。GUTK在EBSS中于1.25，2.5，5和10μM能够浓度依赖性地抑制HeLa的生长，同时激活了PARP，说明GUTK在饥饿情况下能够抑制肿瘤细胞生长。 3、在饥饿状态下，GUTK可以促进肿瘤自噬，使用自噬抑制剂HCQ可以抑制GUTK诱导的自噬，从而抑制GUTK诱导的caspase家族的活性，证明了GUTK是自噬的诱导剂。 4、GUTK在饥饿情况下作用于HeLa细胞2小时后，能够显著地促进HeLa细胞内活性氧簇(ROS)的增加，当用ROS抑制剂NAC后细胞内ROS明显减少，由western blot结果看出GUTK可使JNK的磷酸化升高，说明GUTK在饥饿时诱导的自噬与ROS/JNK相关。 5、Akt/mTOR通路是与自噬相关的通路，western blot结果显示在饥饿状态下，GUTK可以抑制Akt和mTOR的磷酸化，进而促进自噬的发生。 结论:GUTK可以诱导肿瘤细胞的自噬作用，并且在营养缺乏的情况下可通过Akt/mTOR通路诱导肿瘤细胞发生细胞死亡。