CP7菌株抗菌代谢物的研究

• 作 者: 苑园园
• 机 构: 华南农业大学
• 出 处: 华南农业大学
• 发表日期: 2010年期
• 关键词: CP7菌株 抗菌蛋白 嗜水气单胞菌 产酶培养条件

抗菌多肽应用于医学、植物病虫害的防治研究一直受到人们的重视。从微生物中发现的抗真菌、细菌的多肽已有一些被应用于治疗人类、动植物的疾病。CP7菌是导师课题组筛选分离的一株高效分泌抗菌物质的多粘类芽孢杆菌,在过去的研究中,已经明确该菌分泌的抗菌物质有抗G+、G-和真菌的3种性质不同的多肽。为了更好地开发利用该菌,本研究在已有的基础上,利用微生物学、分子生物学的技术方法,建立了CP7菌株抗菌蛋白粗提液中抗细菌物质效价标定的方法,探索CP7菌抗菌蛋白对鱼致病菌嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila的抑杀效果和作用机制,优选CP7菌产抗真菌活性物质β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵培养条件。获得的主要结果有:　　
1.建立了CP7抗菌蛋白粗提液中抗细菌物质效价的标定方法。用管碟法、琼脂凝胶内扩散法、比浊法标定CP7抗菌蛋白粗提液待测液中Cpacin的抗菌效价分别为2.25U/mL、2.38U/mL、2.22U/mL,平均2.28U/mL。多粘菌素的效价为319.13I/mL、324.06U/mL、315.53U/mL,平均319.57U/mL。　　
2.抑菌试验显示CP7抗菌蛋白粗提液对嗜水气单胞菌有抑制作用,采用二倍稀释法测定CP7抗菌蛋白粗提液对嗜水气单胞菌的MIC为12.5％,MBC为25％。　　
3.采用钼锑抗比色法检测到抗菌蛋白粗提液处理嗜水气单胞菌菌体后,会在短时间内引起细胞内磷的急剧性泄漏。　　
4.用扫描电镜和透射电镜观察,嗜水气单胞菌经CP7抗菌蛋白粗提液处理后,细胞表面变得粗糙,高浓度处理时,细胞形态变形,细胞表面出现明显的缺损现象。而且,细胞壁和细胞膜受到严重破坏,出现孔洞,胞内内容物外泄,引起大量细胞死亡。　　
5.对CP7菌株产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的发酵培养条件进行了优化,筛选出适合CP7菌株产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最佳培养基配方是:麦芽糖5％,硫酸铵0.8％,MgSO4·7H2O 0.15％,K2HPO4·3H2O 0.11％,吐温80 0.125％。最优的发酵条件是:250mL三角瓶装液量40mL时,接种量1％,培养温度30℃,发酵时间48h,发酵初始pH为5.0。用优选的培养基配方和发酵条件培养时,菌株的产酶水平由原来的230.57U/mL提高到783.19U/mL,比初始的产酶水平提高了2.4倍。　　
6.CP7菌株的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,反应的最适温度为50℃,酶促反应适宜的pH值为6.0-7.0。酶的耐热性不强,超过60℃时容易失活。　　
7.金属化合物CuSO4、KC1、NH4C1对CP7菌株的β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活有一定的激活作用。CaCl2、BaCl2、FeCl3、MgSO4、ZnSO4、FeSO4对酶活有抑制作用,其中.ZnSO4、FeSO4的抑制作用强烈。