【摘 要】
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目的：用腺病毒感染,脂质体转染两种方法将PDCD5基因导入人多发性骨髓瘤细胞KM3和U266,人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2四种细胞株,比较其转染效率,并对PDCD5mRNA
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目的：用腺病毒感染,脂质体转染两种方法将PDCD5基因导入人多发性骨髓瘤细胞KM3和U266,人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2四种细胞株,比较其转染效率,并对PDCD5mRNA和蛋白的表达进行检测,以探索一种适合MM细胞的外源基因导入法,为后续进行PDCD5基因促进多发性骨髓瘤细胞凋亡机制的研究提供载体。方法：利用本实验已构建的真核表达质粒pYr-ads-4-PDCD5,设转染目的基因组、转染空载体组、未转染组三组；构建及包装腺病毒rAd-PDCD5-EGFP,设置感染目的基因组、感染空载体组、未感染组三组,分别采用脂质体LipofectamineTM2000转染,腺病毒感染多发性骨髓瘤细胞KM3及U266细胞,人慢性粒细胞白血病细胞K562,肝癌细胞HepG2,48h后在荧光显微镜下观察转染效率,并予实时荧光定量PCR (Real-time Quantitative PCR, qPCR)、蛋白免疫印迹术(Western blot)分别检测PDCD5在四种细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达。结果：脂质体介导的PDCD5重组质粒对KM3, U266及K562的转染效率分别约为45%,49%,55%,对HepG2的转染效率约为70%,实时荧光定量PCR及Western blot测定PDCD5mRNA表达水平和PDCD5蛋白表达水平目的基因组均明显高于转染空载体组和未转染组,转染空载体组和未转染组间无明显差异。腺病毒rAd-PDCD5-EGFP对KM3及U266感染效率分别为33%,29%,对K562细胞感染效率为65%,但对HepG2细胞感染效率较高,约为80%,实时荧光定量PCR及Western blot测定PDCD5RNA表达水平和PDCD5蛋白表达水平目的基因组均明显高于感染空载体组和未感染组,感染空载体组和未感染组间无明显差异。结论：脂质体对KM3及U266的转染效率高于腺病毒,脂质体转染法对于骨髓瘤细胞而言,是一种有效的外源基因转入方式,可为PDCD5基因促MM细胞凋亡机制的研究提供载体。
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