母代孕期高脂饮食通过卵巢kisspeptin/GPR54系统影响子代卵巢功能的实验研究

• 作 者: 周志阳
• 机 构: 温州医科大学
• 出 处: 温州医科大学
• 发表日期: 2019年1期
• 关键词: 妊娠期体重增长过快

研究目的
　　妊娠期体重增长过快已经成为一个重要的临床问题，对后代的健康会产生长远的影响。越来越多的研究表明，卵巢kisspeptin/GPR54系统直接参与了卵巢一系列的生理活动。我们在大鼠孕期使用高脂饮食来建立妊娠期体重增长过快模型，观察其对子代的卵巢功能的影响及其相关机制。
　　研究方法
　　1.雌鼠与雄性大鼠交配后，通过检查阴道栓确定已经怀孕。将怀孕后的雌性大鼠随机分为两组：正常饮食组（NCD组）和高脂饮食组（HFD组）。子代出生后，将所有大鼠饮食改为正常饮食，并将子代数量调整为每窝12只。在出生后第4天(新生儿期)和第30天(青春前期)收集卵巢组织进行研究。
　　2.记录阴道口开放的时间，并立即连续2周监测动情周期。
　　3.提取卵巢原代颗粒细胞以及出生后4天的卵巢，使用kisspeptin-10在体外刺激，观察其对颗粒细胞和卵巢组织的直接作用。
　　研究结果
　　1.HFD组的新生大鼠卵巢与NCD组比较具有较低数量的次级卵泡，而原始卵泡、初级卵泡、闭锁卵泡的数量没有差异。免疫组织化学染色结果显示两组卵巢卵泡刺激素受体(FSHR)和kisspeptin蛋白的表达量没有差异。
　　2.在青春期前，HFD组与NCD组比较窦卵泡和排卵前卵泡数量增加，typeⅢ型卵泡减少，次级卵泡和闭锁卵泡的数量没有差异。同时，HFD组排卵相关基因表达减少，而卵泡生长相关基因和类固醇激素合成相关基因的表达水平升高。另外，HFD组的卵巢与NCD组比较，kiss1mRNA和kisspeptin蛋白显著增加而kiss1rmRNA和GPR54没有变化。
　　3.HFD组大鼠较NCD组大鼠相比，青春期发动明显提前，且发情周期不规律，呈现出持续的发情前期和发情期。
　　4.kisspeptin-10在体外不同浓度处理原代颗粒细胞后明显增加了原代颗粒细胞的活力。且kisspeptin-10在体外直接作用于新生儿大鼠卵巢后明显增大了卵母细胞的大小。
　　研究结论：
　　本研究表明，母代妊娠期体重增长过快对大鼠生殖功能有着长期的影响，包括卵泡发育异常、排卵异常、青春期提早发动、发情周期不规律等。而卵泡内kiss1mRNA和kisspeptin蛋白表达水平的上调提示卵巢kisspeptin/GPR54系统可能与其卵泡发育异常和排卵失调有关。同时体外实验表明了kisspeptin-10直接促进卵巢颗粒细胞活力以及促进卵母细胞发育。