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恙虫病(tsutsugamushi disease, scrub typhus)是由恙虫病东方体Orientia tsutsugamushi,Ot)引起的自然疫源性疾病,主要分布于热带、亚热带的亚太平洋地区,在我国广泛分布。以鼠类为主要传染源,经恙螨幼虫叮咬而传给人。临床上以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为特征。诊断试剂的缺乏、临床医生认识不足、临床症状不典型等原因致使国内经常出现误诊现象。目前该病的诊断主要依赖血清学技术,但血清抗体检测方法不仅需要特殊仪器如荧光显微镜,还需要等到恢复期采集第二次血液标本。病原体分离培养诊断十分可靠,但分离率低且耗时。以各种PCR为基础的分子生物学技术通过检测病原体核酸可以取代分离培养进行病原体检测,除检出阳性率外,也需要特殊仪器及一定的实验室完成。因此,研发一种灵敏、特异、简单快速、经济尤其是适用我国广大农村地区的诊断试剂是我们疾病监测工作者的当务之急。国内外大量研究表明,恙虫病东方体56-kD膜蛋白(全长基因2280bp)是一个型特异性抗原,约占菌体蛋白的10-15%。该蛋白经血清学和动物试验证明有很好的抗原性,并且在Ot侵入细胞的过程中起重要作用。本研究以我国优势流行株--恙虫病东方体Karp血清型为基础,通过56-kD膜蛋白生物信息学如二级结构、亲水性、B细胞表位等系列分析,最终选择去除信号肽,表达包含有重要免疫决定簇的大部分中间片段(100-468位氨基酸)通过引物设计,PCR扩增1104bp目的基因、连接构建了pET30a(+)表达载体,通过转化Rosetta表达菌,获得预期大小的高丰量表达蛋白。该蛋白氨基酸质谱分析与实验设计目标蛋白氨基酸100%同源。该蛋白与天然菌体-Ot Karp菌株兔免疫血清进行ELISA及Western blot半定量实验结果显示该蛋白不仅具有良好的模拟天然免疫活性,而且抗原抗体反应(ELISA IgG抗体效价1：1600,Western blot IgG抗体效价1：1600)灵敏性远远高于间接免疫荧光(IFA IgG抗体效价1：512)实验。通过与遗传关系密切的16种立克次体目成员以及10种临床常见致病菌兔多克隆抗血清ELISA反应,结果发现该蛋白除了与恙虫病东方体泰国株TA763.TA817血清型存在一定交叉反应外,与嗜吞噬细胞无形及五日热巴尔通体存在弱交叉反应外,与其他细菌均无交叉反应。这一特异性及免疫活性良好的重组抗原将为进一步简单、快速诊断试剂及疫苗的研发奠定必要的前期基础。