汉赛巴尔通体间接ELISA方法的建立与应用

来源 :中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lxting86
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汉赛巴尔通体是人类猫抓病的主要致病菌,可经过媒介节肢动物及动物的抓伤和咬伤传播,在人群、家猫、啮齿类动物及其他哺乳动物中有很高的感染率,给人类的生命和财产带了严重的威胁,由于其临床表现复杂多样,很容易同其他疾病想混淆,从而给诊断和治疗带来一定的困难。本研究旨在建立一种灵敏特异且简便的酶联免疫学方法,并用此方法对我国部分地区的人群、家猫及啮齿类动物进行初步的流行病学调查。 应用超声波裂解细菌制备的抗原包被酶标板,成功建立了检测血清抗体的间接ELISA方法。确定了ELISA的最适条件为:抗原包被浓度为11ug/ml,封闭液的浓度为0.25%BSA-PBST,酶标羊抗猫IgG的工作浓度为1:16000,碱性磷酸酶标记的A蛋白的工作浓度为1:2000。 经过重复试验、阻断试验、交叉试验等证实本研究建立的间接ELISA重复性好,特异度高,板内及板间变异系数分别为3.4~4.84%,3.4~14.14%,用间接免疫荧光方法确诊的汉赛巴尔通体阴性人及猫血清标本,ELISA方法测其OD值,并计算PI值及其均数和标准差,以M+2SD作为间接ELISA方法的cut-off值,灵敏度和特异度分别为:70.6%和91.6%(人血清),68.3%和91.6%(猫血清),阳性预测值为,猫:79.49%,人:82.2%,阴性预测值为,猫:85.71%,人:84.94%.此结果表明本研究建立的间接ELISA方法是一切实可行的免疫学方法。通过家猫和BALB/c及昆明小鼠的动物感染试验,用本研究建立的间接ELISA方法,检测了动物不同感染天数的血清抗体情况,证实动物感染后从5-7d抗体滴度开始升高,在第14-18d达到高峰并维持在平台期。 利用本研究建立的间接ELISA方法,对我国河南、河北、山东、北京等部分地区的人群、家猫及啮齿类动物进行了汉赛巴尔通体抗体的血清流行病学调查,发现在北京地区体检人群中其血清抗体阳性率为34.5%,河南省人群的血清抗体阳性率为36.6%,男性感染率35.6%,女性感染率36.9%,不同年龄阶段的人群感染率略有不同,分别是18岁以下未成年人及18~50岁中年人阳性率均为31.1%,而50岁以上人群的抗体阳性率为42.1%。家猫总的感染率为27.8%,啮齿类动物的感染率高达41.8%,此结果说明了在我国无论是人群还是动物,汉赛巴尔通体均有很高的抗体阳性率。
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