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背景重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床常见的消化系统疾病,其中20%-25%的病人病情易加重,可出现局部或全身并发症、多器官功能衰竭甚至威胁生命。SAP治疗方法包含内科、外科、中医科等,以内科治疗为主,且该病具有起病急、病情凶险、发病率较高的疾病,SAP易并发全身炎症反应综合征(systematic inflammatory response syndrome,SIRS),因此,针对SIRS寻找特异性靶点抑制炎症的发生发展可能是一条出路。目的1.TNFAIP3/A20在胰腺和肝脏组织中的表达情况,探讨IKK/IκB/NF-ΚB信号通路在SAP(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺早期的激活状况。2.谷氨酸-酰胺酸-tRNA合成酶(glutamyl-prolyl-tRNA synthetase,EPRS)在胰腺和肝脏组织中的表达情况,并探讨IKK/IκB/NF-ΚB信号通路及其相关蛋白在SAP大鼠发病早期的相关发生机制。方法1.逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立SAP模型(1)96只将成年SD(Sprague-Dawley)大鼠,雌性,随机分为DEX治疗组(32只),SAP模型组(32只),SO组(32只)等三组;分别按照2、6、12、24小时四个时间点各处死老鼠8只。DEX治疗组和SAP模型组大鼠采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠(sodium taurocholate,STC)(0.1ml/100g)建立SAP模型,SO组大鼠用生理盐水替代stc。dex组大鼠下肢肌注0.5mg/100g地塞米松治疗,其余两组不干预。心脏取血方式处死大鼠。(2)取胰腺、肝脏组织行he染色观察胰腺、肝脏病理损伤。(3)生化试剂盒检测血清淀粉酶(ams)。2.elisa法检测nf-κb信号通路相关因子,免疫组化及rt-pcr法检测eprs的表达(1)elisa法测胰腺组织中iκb、tlr4、inf-γ、nf-κb蛋白含量。(2)免疫组化法检测肝脏组织中eprs蛋白定性表达情况。(3)定量逆转录聚合酶反应(rt-pcr)测定胰腺、肝脏组织中eprsmrna的表达情况。3.elisa法检测nf-κb信号通路相关因子,免疫组化及rt-pcr法检测tnfaip3/a20的表达(1)elisa法测胰腺组织中iκb、tlr4、inf-γ、nf-κb蛋白含量。(2)免疫组化法检测胰腺组织中tnfaip3/a20蛋白定性表达情况。(3)定量逆转录聚合酶反应(rt-pcr)测定胰腺、肝脏组织中tnfaip3/a20mrna的表达情况。结果1.so组、sap组、dex组模型血清淀粉酶及病理结果的比较(1)sap组、dex组大鼠血清淀粉酶均较so组血清升高,dex组血清ams较sap组降低。(2)he胰腺病理评分示dex组各时间点炎症损伤sap组大鼠明显减轻(p<0.01),以24小时时间点尤为明显。且sap组、dex组胰腺炎症损伤随时间推移损伤加重(p<0.05),而各时间点so组胰腺轻度水肿,损伤无明显变化。dex组、sap组肝脏病理炎症损伤随时间增加而加重,于24h时间点达到高峰,dex组各时段较sap组炎症损伤减轻(p<0.05),而各时间点so组肝脏炎性损伤无明显变化。2.nf-κb、iκb、tlr4、inf-γ及eprs的表达(1)用elisa检验法测定dex组、sap组大鼠中肝脏nf-κb、iκb、tlr4、inf-γ含量在6小时时间点达到高峰,dex组各时间点肝脏nf-κb、iκb、tlr4、inf-γ含量较sap组降低,而so组各指标不随时间变化。(2)RT-PCR结果示DEX组胰腺、肝脏EPRS mRNA表达量较SAP组升高,6h DEX组胰腺EPRS mRNA较SAP、SO组明显升高。(3)6 h时间点SO组大多数大鼠肝脏EPRS蛋白为弱表达,而SAP组则为弱表达与强表达参半,DEX组则绝大多数为强表达。6h时间点SO组、SAP组和DEX组,三组EPRS蛋白表达差异明显(P<0.01);6h时间点SO组、SAP组和DEX组三组进行EPRS蛋白含量两两比较,SO组与SAP组无明显差异,而SO组与DEX组,SAP组与DEX组差异具有显著性,6h DEX组EPRS蛋白表达较6 h SAP组表达增加,EPRS蛋白在三组大鼠胰腺表达不明显。3.NF-κB、IκB、TLR4、INF-γ及TNFAIP3/A20的表达(1)DEX组胰腺NF-κB、IκB含量较SAP组降低,SO组无明显变化。TLR4、INF-γ在各组胰腺组织内无明显表达。(2)RT-PCR结果示DEX组胰腺TNFAIP3/A20较SAP、SO组明显升高。(3)免疫组化结果示DEX组TNFAIP3/A20表达较SO组、SAP组增多,且随时间变化呈递增趋势。结论1.EPRS在SAP发生早期肝脏表达达到高峰,激活逆转录系统,通过抑制炎症基因翻译细流从而协同参与DEX对SAP炎症早期的抑制作用。2.TNFAIP3/A20可能存在协同IκB作用从而阻断NF-κB/IκB信号通路转导,并抑制SAP大鼠胰腺炎症的发生发展。